小鼠单核巨噬细胞白血病细胞（RAW264.7）的培养要点及高效转染试剂

  小鼠单核巨噬细胞白血病细胞（RAW264.7）是通过Abelson鼠白血病病毒诱导BALB/c小鼠产生肿瘤后得到的细胞株。其在医学研究中应用十分普遍，是许多白血病相关研究模型的常用细胞株，在微生物学、免疫学等研究中也十分常用。但RAW264.7细胞形态和分化状态多变，在实际培养中较难把握，给科研工作带来了一定困难；且RAW264.7细胞很难转染，许多研究者表示Lipofectamine 2000根本转不进去，或者仅有不到10%的转染效率。因此RAW264.7细胞的培养及转染方法就很值得去探讨，本文就这些方面进行介绍，以供科研工作者借鉴。

一、RAW264.7细胞的形态特征

       很多人养RAW264.7细胞时发现自己的细胞出现伪足；就连ATCC的描述也称RAW264.7细胞形态多样，可有圆形、类圆形，以及长出伪足的长梭形、多边形，可单核可多核。而实际，有伪足的情况是RAW264.7细胞受到外界刺激进行了分化，是细胞衰老、分化的表现；RAW264.7细胞的“最佳"形态应是较小的单核圆形细胞。

二、RAW264.7细胞的培养条件

       RAW264.7细胞的培养环境与一般贴壁细胞并无差异。即培养箱温度为37℃，CO2浓度为5%。ATCC推荐的培养基为DMEM+10%的胎牛血清；实际上，经研究者们实验发现高糖型DMEM培养的RAW264.7细胞传代后贴壁更快、细胞生长速度更快。因此，推荐使用高糖型DMEM，FBS浓度为10%，作为RAW264.7细胞的培养基。

三、RAW264.7细胞的传代

       关于RAW264.7细胞的传代方法，ATCC推荐使用细胞刮刀。也可采用0.25%的胰酶消化或采用弯嘴吸管吹打等方法。采用细胞刮刀进行传代时，细胞能最大限度被收集起来，但会对细胞造成机械性损伤、影响细胞形态及贴壁时间等。采用胰酶消化时，由于RAW264.7细胞贴壁较牢，消化时间就较长。但消化时间点不易把握，易消化过度，对细胞生长造成抑制。

       因此，推荐使用弯嘴吸管吹打进行传代。具体做法是，当细胞达到传代密度时，先弃去培养基，用预冷的PBS洗涤两次，用弯嘴吸管吸取培养基，均匀、稍用力吹打瓶底，即可将细胞吹打下来（吹不下来的就不要了），离心后重悬即可分瓶培养。2 h后可见细胞贴壁。

由于RAW264.7细胞生长速度较快，一般1-2d换液1次，密度长至60%-70%左右即可传代，传代比例可为1:3-1:6。若传代间隔太久，细胞生长密度过大，细胞也容易发生分化，出现长伪足的多形细胞。

四、RAW264.7细胞的冻存及复苏

       RAW264.7细胞的冻存及复苏方法与一般贴壁细胞并无较大差别。但由于RAW264.7细胞对外界刺激较敏感，对营养条件要求较高，许多人建议降低DMSO的浓度，增加FBS血清的浓度。因此冻存液的推荐配方为5% DMSO和20% FBS的培养基（小鼠单核巨噬细胞白血病细胞的培养及其在诱导破骨细胞中的应用，许丹等，中国骨质疏松杂志，2016, 10, 22, 10）。

五、RAW264.7细胞的转染

（一）以往转染数据

      RAW264.7细胞是一种巨噬细胞，有很强的贴壁性和伪足产生性，其转染较难，一般采用电转或慢病毒稳转的方法。有研究者对RAW264.7细胞用几种不同的转染方法进行处理，对转染效率进行比较。结果发现，脂质体转染（Lipofectamine 2000, Invitrogen）效率很低，仅为12.17±1.53%，慢病毒转染效率是最高，可达34.75 ± 5.30%，罗氏转染（X-treme GENE HP DNA Transfection Reagent, Roche）和电穿孔转染效率分别为16.52 ± 3.86%和15.73 ± 3.29%（巨噬细胞RAW264.7不同转染方法的比较，李亚等，生物技术，2014, 24, 2）。

（二）最新高效转染试剂

       既然RAW264.7细胞这么难转染，实验还得继续，那怎么办呢？

       目前ZETA LIFE新推出一款Advanced系列高效DNA、RNA转染试剂。其广泛适用于贴壁细胞和悬浮细胞的转染，可转DNA、RNA，也可共转染，还可进行小动物活体转染。

这一款转染试剂有以下几个特点：

       1.适用细胞广

       广泛用于293T，9L，A172, A375, A549, COS7, CHO-K1, C6S, C2C12, NIH3T3, RG2, T98G, U87, U118, MDCK, MCF-7, HT1080, HEK, H4, RAW264.7等多种细胞系。

      2.细胞毒性低

      其最高细胞存活率可高达98%，平均细胞存活率可达80%。

       3.转染效率高

       其最高转染效率可高达96%，平均转染效率可达70%。

（三）Advanced系列高效DNA、RNA转染试剂转染质粒进RAW264.7的实例（来自实验者的实际数据）

由上图可明显看出Advanced系列高效DNA、RNA转染试剂对RAW264.7转质粒的转染效率高达95%以上，且细胞存活率较高。

       相信Advanced系列高效DNA、RNA转染试剂 将是您对的选择，希望能为您的研究助力。

Zeta Life高效Advanced DNA RNA转染试剂系列：                     

品牌：美国Zeta Life  货号：AD600025  （Zeta Life原代细胞转染试剂）0.25ml/1590元

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品牌：美国Zeta Life  货号：AD600075  （Zeta Life可代谢转染试剂）0.75ml/2890元

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品牌：美国Zeta Life  货号：AD601000  （Zeta LifeRAW264.7细胞转染试剂）10ml/27480元

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