为什么不能用质粒DNA抽提试剂来提取基因组DNA？

导读

    为什么同样抽提质粒DNA的试剂不能用来抽提基因组DNA呢？差别很大么？要买两种试剂盒真是麻烦啊！你还不要不相信，有小伙伴试过，还真没抽提出来。今天小编就来和大家一起探究下原因！

基因组DNA的抽提，一般不会用到质粒抽提的试剂盒，究其原因是由于两者的原理*不同。两者不都是DNA抽提么？其实关键在于这两者在实验的初始设计上就*不同。先给大家解释一下质粒抽提吧。

质粒抽提

质粒抽提通常用的是碱裂解法，一般的试剂盒都会有 SolutionⅠ，SolutionⅡ，SolutionⅢ，有的还会有 SolutionⅣ，然后是过柱子。

SolutionⅠ

    SolutionⅠ一般都是用来重悬菌液的，会加入RNaseⅠ，降解掉里面大肠杆菌的RNA。同时里面还会用Tris-HEI体系来维持一个pH，另外会加入较大量的EDTA，去螯合掉里面二价金属离子，使菌体本身的DNase失活。其实用双蒸水来代替SolutionⅠ问题也不大，关键就是把菌重悬起来就行。

Solution Ⅱ

    Solution Ⅱ，一般来说主要成分有两个，就是NaOH和SDS，NaOH主要是用于破坏细胞膜结构，强碱条件下，菌体的细胞壁结构、细胞的磷脂双分子层和微囊结构的构相都会发生变化。而SDS在这里主要并不是起到裂解蛋白的作用，而是结合氨基酸，一般两个氨基酸可以结合一个SDS分子。菌体裂解后，其实小片段的质粒已经释放出来了，而大片段的基因组DNA还结合在蛋白质上。

Solution Ⅲ

    Solution Ⅲ的主要成分是醋酸钾/醋酸缓冲液。首先长时间强碱环境下，DNA会断裂，所以需要用醋酸进行中和，而钾离子可以与SDS产生沉淀反应，使可溶于水的十二烷基磺酸钠变成不溶于水的十二烷基磺酸钾。这样结合蛋白质的PDS就被沉淀下来了，同样基因组DNA也同样被沉淀了下来，用硅胶吸附释放在上清里的质粒，或者用无水乙醇对上清进行沉淀，即可获得质粒的DNA。

基因组DNA抽提

而普通的基因组 DNA 抽提，首先是裂解，用离子型的蛋白变性剂：CTAB 或者 SDS 对细胞进行裂解（加不加蛋白酶 K 其实并不太要紧），破膜的同时使得 DNA 从蛋白上解离下来。 加入高盐溶液使蛋白质沉淀。然后用酚仿，使蛋白质沉淀变性在水相油相间，并分离出的可溶性蛋白。上清用异丙醇将 DNA 沉淀下来，同时低温加入一定量的一价阳离子，可加速 DNA 沉淀。这些能和上述的质粒抽提混为一谈么？！当然不行啊！ 

小伙伴们现在能明白为啥基因组 DNA 不能用质粒抽提的试剂了吧……