【DNA 电泳】教你做果冻：琼脂糖凝胶电泳实验技巧分享

果冻晶莹剔透，口感 QQ 的，其实果冻的原料琼脂糖，也是我们平时用来跑电泳的材料，琼脂糖凝胶电泳实验常用以 DNA 切胶回收，DNA 分离和用于佐证 DNA 是否重组、质粒等是否切开。今天我们就来聊聊琼脂糖凝胶电泳实验的一些小技巧小细节。

第一步：胶液的制备 

称取 0.4g 琼脂糖，置于 200ml 锥形瓶中，加入 50ml 0.5×TBE 稀释缓冲液，放入微波炉里加热，直到琼脂糖全部熔化，取出摇匀，此为 0.8%琼脂糖凝胶液。总液体量不宜超过锥瓶的 50%容量。否则会溢出来的。还要擦洗微波炉。加热过程中要不时摇动，使附于瓶壁上的琼脂糖颗粒进入溶液。加热时应盖上封口膜，以减少水份蒸发。

第二步：胶板的制备 

倒胶时的温度不可太低，否则凝固不均匀。东一块西一块的。果冻做出来就不好看啦。速度也不可太快，否则容易出现气泡。果冻做出来里面都是气泡。怎么吃呀？待胶*凝固后拨出梳子，注意不要损伤梳底部的凝胶。

第三步：加样 

注意上样时要小心操作，避免损坏凝胶或将样品槽底部凝胶刺穿。果冻下面被戳个窟窿，还怎么吃呀？

第四步：电泳 

加完样后，合上电泳槽盖，立即接通电源。控制电压保持在 60-80V，电流在 40mA 以上。当溴酚蓝条带移动到距凝胶前沿约 2cm 时，停止电泳。

第五步：染色 

未加 EB 的胶板在电泳完毕后移入 0.5μg/ml 的 EB 溶液中，室温下染色 20-25 分钟。

第六步：观察和拍照 

在波长为 254nm 的长波长紫外灯下观察染色后的或已加有 EB 的电泳胶板。DNA 存在处显示 出肉眼可辨的桔红色荧光条带。紫光灯下观察时应戴上防护眼镜或有机玻璃面罩，以免损伤眼睛。

除这些细节之外，还有一些注意事项： 

1、酶切时所加的 DNA 溶液体积不能太大，否则 DNA 溶液中其他成分会干扰酶反应。 

2、酶活力通常用酶单位（U）表示，酶单位的定义是：在最适反应条件下，1 小时*降解 1 mg λDNA 的酶量为一个单位，但是许多实验制备的 DNA 不象 λDNA 那样易于降解，需适当增加酶的使用量。反应液中加入过量的酶是不合适的，除考虑成本外，酶液中的微量杂质 可能干扰随后的反应。 

3、市场销售的酶一般浓度很大，为了省着点儿花，使用时可事先用酶反应缓冲液进行稀释。 另外，酶通常保存在 50%的甘油中，实验中，应将反应液中甘油浓度控制在 10%以下，否则，酶活性将受影响。 

4、观察 DNA 离不开紫外透射仪，可是紫外光对 DNA 分子有切割作用。从胶上回收 DNA 时， 应尽量缩短光照时间并采用长波长紫外灯(300-360nm），以减少紫外光切割 DNA。

5、EB 是强诱变剂，还有中等毒性，就是有致癌性。配制和使用时都要戴好手套。尽量不要把 EB 洒到桌面或地面上。如果真的不幸洒到桌面或地面上了，凡是沾污了 EB 的容器或物品必须经专门处理后才能清洗或丢弃。

6、当 EB 放太多了，胶染色过深，DNA 带看不清的时候，可将胶放入蒸馏水冲泡，30 分钟后再观察。 

以上，安培君介绍了做果冻，啊，不！做琼脂糖凝胶电泳实验的一些小技巧小窍门，也希望大家伙儿做出好吃的“果冻"来。