常见细胞培养试剂的配制方法分享

培养用液是维护组织细胞生存、生长及进行细胞培养各项操作过程中所需的基本溶液。常用的细胞培养试剂包括：超纯水，平衡盐溶液，消化液，PH调整液，谷氨酰胺溶液，抗生素溶液。

常见的超纯水

1. 使用纯水机纯化而来；

2. 蒸馏水和离子交换水

3. 三蒸水

平衡盐溶液

1、平衡盐溶液主要由无机盐、葡萄糖组成，它的作用是维持细胞渗透压平衡，保持pH稳定及提供简单的营养。主要用于取材时组织块的漂洗、细胞的漂洗、配制其他试剂等。

2、D-Hank’s与Hank’s的一个主要区别在于前者不含有Ca2+、Mg2+，因此D-Hank’s常用于配制胰酶溶液。

3、配制平衡盐溶液也应当用三蒸水。如果配方中含有Ca2+、Mg2+，应当首先溶解这些成分。配好的平衡盐溶液可以过滤除菌或高温高压灭菌.

几种常见的平衡盐溶液配方：

消化液

（1）以配制250ml0.25%DEDTA的胰酶为例，称取胰蛋白酶粉末0.625g置烧杯中，先用少许D-Hanks 或PBS平衡盐溶液（pH7.2 左右）调成糊状，然后再补足D-Hanks 平衡盐溶液，并不断搅拌振荡直到搅拌混匀，置室温4 小时或冰箱过夜；

（2）次日，先用滤纸粗滤，再进行过滤除菌，定容至250ml，分装于盐水瓶或三角瓶，低温冰箱保存备用，胰酶常用浓度为0.25% 或0.125%。

胰蛋白酶作用于与赖氨酸或精氨酸相连接的肽健，除去细胞间粘蛋白及糖蛋白，影响细胞骨架，从而使细胞分离。

胰蛋白酶液浓度越高，作用越强，但超过一定限度会损伤细胞。

胰蛋白酶是一种黄白色粉末，用无Ca2+、Mg2+的PBS缓冲液配制常用的胰蛋白酶液浓度是0.25％ 。用滤器过滤除菌。

胰蛋白酶液消化时间：2-10分钟，用含血清培养液终止其对细胞的消化作用。

pH调整液

常用的有HEPES液和NaHC03溶液

 1.NaHC03溶液:NaHC03是培养基中必须添加的成分，一般情况下是按照说明书的要求准确添加，以保证培养基在5%CO2的环境下pH达到设计标准。

 2．HEPES液：HEPES是一种弱酸，中文名称是羟乙（乙）基哌（派）嗪乙硫磺酸。HEPES对细胞无毒性，主要作用是防止培养基pH迅速变动

100X的Hepes配制：取23.8g的HEPES溶于90ml的双蒸水中 ，用1N的NAHCO3调PH至7.8-8.0之间，过滤除菌，定容至100ml.

谷氨酰胺补充液:

谷氨酰胺在细胞代谢过程中起重要作用，合成培养基中都要添加，由于谷氨酰胺容易降解，所以都是在使用前添加。谷氨酰胺使用终浓度为0.002mol/L。

一般配制为100倍浓缩液，配制时应加温至30℃，*溶解后过滤除菌，分装至小瓶，储存于-20℃。

抗生素溶液:

常用的是青链霉素，俗称“双抗溶液"。

青霉素主要对革兰阳性菌有效，链霉素主要对革兰阴性菌有效。加入这两种抗生素可预防绝大多数细菌的污染。

青霉素使用的终浓度为100000U/L，链霉素使用的终浓度为0.1g/L。一般配制成100倍浓缩液，可用PBS或培养基配制。