细胞培养之真菌细菌污染的防治方法

请遵守细胞污染永恒定律：无论什么细胞只要是不重要的细胞污染了，立刻加84弃之，重新复苏新冻存管培养；实在需要挽救的请参考以下：

细菌污染：主要有洋葱霍尔伯德菌型污染

确定是非常珍贵的细胞 建议分别配置含10倍庆大霉素和两性霉素溶液（G/A)的PBS和5倍庆大霉素和两性霉素溶液（G/A)的*培养基各一份。然后先用10倍双抗的PBS洗涤细胞5-10次， 然后用5倍双抗的*培养洗涤细胞3次以上,再加上含双倍的G/A溶液放培养箱培养，一个小时后换液，持续4个小时后，再加上正常培养细胞所需的抗生素，过夜，到最终确定细胞没有任何污染物，因此时细胞受损过大，建议优化培养基方式（血清提高2%-5%）或者立即冻存细胞，一个月后复苏。

真菌污染：

污染的多是曲霉菌，白色念珠菌，酵母菌，黑霉菌，孢子菌，真菌主要以预防为主，防治为辅，已经污染了，建议采用以下方法：

1. 细胞一旦污染，很难挽救，即使使用制霉菌素或放线菌素D，也是伤敌八千自损一万的办法，可使用抗生素进行查杀，但是高浓度的抗霉菌素对细胞有毒性作用。

2. 把所有细胞从污染的CO2孵箱转移，采用过氧乙酸擦洗孵箱(全部，尤其四个角)。并把过氧乙酸放置在孵箱内一个小时，使其蒸汽弥漫。待过氧乙酸的气味消散后，再移入细胞；

3. 用0.5%新洁尔灭擦拭超净台和墙壁，确保不留死角，地面用新洁尔灭消毒液拖地。

4. 将环境*消毒，整个培养间高锰酸钾或者乳酸熏蒸,孵箱内部包括托盘等全部用苯酚搽洗,封闭2天。

真菌污染预防方法：

1)，将细胞移出来，用微量硫酸铜溶液擦拭CO2孵箱内，再把水盘里加适量硫酸铜或者酸氢二钠高盐液体防止霉菌

2)孵箱应定期清洁，大约一个月左右清洁一次，

3)可在培养基里加两性霉素或制霉菌素)或[放线菌素D或双抗进行预防。

4)最主要的还是要培养良好的无菌观念，实验室尽量不要大声说话，佩戴好口罩，手套，操作时应小心，避免培养基撒入培养箱以及生物安全柜，这些撒入培养箱的培养基为细菌及真菌的繁殖提供了很好的条件。