qPCR实验为什么要制作熔解曲线？

荧光DNA结合染料法的缺点是它们能在反应中结合所有DNA双链，包括在实时荧光PCR中产生的引物二聚体，和其他非特异性产物，引起大量的背景噪声信号。

这种噪声会影响我们对靶基因产量的评估，甚至荧光强度和靶基因的起始量、全长根本没什么关系。

因此，我们使用荧光DNA染料结合法时，需要对扩增产物进行熔解曲线的分析。通过对扩增反应产物逐渐升温，同时监测每一步的荧光信号来制作熔解曲线。

熔解曲线的纵坐标是荧光信号值，横坐标是温度值。通过观察产生的信号峰和对应温度，可以判断产物状态。

理想情况下，熔解曲线应该是单峰，峰值对应温度是特异性产物的退火温度，这才能说明扩增产物中特异性产物占比大。荧光DNA结合染料法的缺点是它们能在反应中结合所有DNA双链，包括在实时荧光PCR中产生的引物二聚体，和其他非特异性产物，引起大量的背景噪声信号。

这种噪声会影响我们对靶基因产量的评估，甚至荧光强度和靶基因的起始量、全长根本没什么关系。

因此，我们使用荧光DNA染料结合法时，需要对扩增产物进行熔解曲线的分析。通过对扩增反应产物逐渐升温，同时监测每一步的荧光信号来制作熔解曲线。

熔解曲线的纵坐标是荧光信号值，横坐标是温度值。通过观察产生的信号峰和对应温度，可以判断产物状态。

理想情况下，熔解曲线应该是单峰，峰值对应温度是特异性产物的退火温度，这才能说明扩增产物中特异性产物占比大。