细胞培养的小常识

细胞体内外培养的差别是什么？

答：细胞离体后，失去了神经体液的调节和细胞间的相互影响，生活在缺乏动态平衡相对稳定环境中，日久天长，易发生如下变化：分化现象减弱；形态功能趋于单一化或生存一定时间后衰退死亡；或发生转化获得不死性，变成可无限生长的连续细胞系或恶性细胞系。因此，培养中的细胞可视为一种在特定的条件下的细胞群体，它们既保持着与体内细胞相同的基本结构和功能，也有一些不同于体内细胞的性状。实际上从细胞一旦被置于体外培养后，这种差异就开始发生了。

二倍体细胞有什么特点？

答：二倍体细胞的染色体组型是2n核型；贴壁依赖接触抑制；一般可传代培养50代；无致瘤性。如W1-38：正常胚肺组织人二倍体细胞系。MRC-5：从正常男性肺组织中获得的人二倍体细胞系。 

什么是动物细胞大规模培养？                

答：所谓动物细胞大规模培养技术（large-scale culture technology）是指在人工条件下（设定pH、温度、溶氧等），在细胞生物反应器（bioreactor）中高密度大量培养动物细胞用于生产生物制品的技术。目前可大规模培养的动物细胞有鸡胚、猪肾、猴肾、地鼠肾等多种原代细胞及人二倍体细胞、CHO（中华仓鼠卵巢）细胞、BHK-21、Vero细胞(非洲绿猴肾传代细胞)等，并已成功生产了包括狂

犬病疫苗、口蹄疫疫苗、甲型肝炎疫苗、乙型肝炎疫苗、红细胞生成素、单克隆抗体等产品。

在过去几十年来，细胞培养技术经有了很大发展，从使用转瓶(roller bottle) 、CellCube等贴壁细胞培养，发展为生物反应器（Bioreactor）进行大规模细胞培养。

培养基中添加了血清和抗生素后，可长期保存吗？

答：一旦您在新鲜培养基中添加了血清和抗生素时，您应该在三到四周内使用它。因为一些抗生素和血清中的基本成分在解冻后就开始降解。

细胞培养基偶然被冻，可否继续使用？

答：如果细胞培养基偶然被冻，您应该自然溶解培养基并观察是否有沉淀产生。如果没有沉淀产生，培养基可以正常使用，如果出现沉淀，只能丢弃这些培养基

培养基及其它添加物和试剂可反复冻融吗？

答：大部分添加物和试剂最多可以冻融3次，如果次数过多会将使液体培养基的保存是冷藏好？还是冷冻好？

答：要冷藏！！通常液体培养基在冷藏条件下可存放6个月到一年。

CO2 培养箱之水盘如何保持清洁？

答：定期(至少每两周一次) 以无菌蒸馏水或无菌去离子水更换之。

购买之细胞冷冻管经解冻后，为何会发生细胞数目太少之情形？

答：研究人员在冷冻细胞之培养时出现细胞数目太少，大都是因为离心过程操作上的失误，造成细胞的物理性损伤，以及细胞流失。建议细胞解冻后不要立刻离心，应待细胞生长隔夜后再更换培养

购买之细胞死亡或细胞存活率不佳可能原因？

答：研究人员在细胞培养时出现存活率不佳，原因比较复杂，常见原因可归纳为：培养基使用错误或培养基品质不佳；血清使用错误或血清的品质不佳；解冻过程错误；冷冻细胞解冻后，加以洗涤细胞和离心；悬浮细胞误认为死细胞；培养温度使用错误；细胞置于–80 ℃太久等。建议严格参照ATCC或ECACC的标准操作规程进行细胞复苏、冻存等工作。

冷冻保存细胞之方法？

答：冷冻保存方法一: 冷冻管置于4℃（30－60 分钟）→-20℃( 30 分钟) → -80℃（16－18 小时或隔夜）→ 液氮罐长期储存。

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