细胞到货后应该如何处理呢？

Q：刚收到细胞，显微镜观察细胞成片漂浮，该如何处理？

可能是消化过度导致了部分细胞的细胞膜受损、凋亡，部分细胞膜受到破坏，导致细胞生长缓慢。若细胞形态有明显变化，且细胞表面有明显黑点，间隙间也有较多黑点，可能是支原体污染，建议空培养细胞培养基，观察黑点是否会增殖。

若还有保种细胞，请复苏靠前代次，并注意观察拍照，有任何问题可以及时联系我司销售处理售后（需提供细胞图片）。

冻管到货时的剩余干冰情况、收货后的保存情况、使用的血清、培养基以及复苏操作不当等原因都可能影响细胞复苏情况。

贴壁细胞：

若复苏时离心，建议48h后换液，如密度达到10%，则继续按说明书正常操作培养；若复苏时没有离心，建议收集悬浮细胞后重新接种。若细胞依然无贴壁增殖，请及时反馈销售处。

悬浮细胞：

建议复苏48小时后观察拍照，若培养基没有变色，部分细胞仍然比较圆润，可继续放置培养后48小时拍照。若细胞全部皱缩，请及时联系销售处理售后。

可能原因如下：

1. 没有及时换液，导致培养基酸度增强、营养成分降低时会出现细胞胞浆产生及空泡；

2. 没有及时传代，细胞生长过密，少数细胞开始在铺满的第一层细胞上生长。很多细胞开始漂浮时，也有部分细胞出现空泡变性；

3. 若密度很低，则细胞密度提高会有所改善，可以提高血清浓度或更换质量更好的血清。若密度高，请及时更换培养基，注意培养基添加量和换液情况，保证细胞有足够营养。

细胞消化时间一般在2~3min，消化期间请不要晃动培养瓶，部分细胞需要延长消化时间，或用PBS清洗2次，吸干净瓶里残留的PBS后用少量胰酶润洗，再次添加1ml胰酶进行二次消化。

消化时放入培养箱，2~3分钟后取出，用手掌心拍打瓶尾观察细胞脱落情况，如没有细胞脱落则继续放培养箱。如果消化5分钟也没有脱落或只有轻微细胞脱落，可以继续放培养箱，或把消化下来的细胞收集终止消化后，将培养瓶内的细胞继续添加1~2ml胰酶继续消化。

当细胞有80%左右脱落且成单个细胞后，可终止消化，用吸管吹打瓶里各部位4~8次，尽量用吸管不用枪头，不要吹出气泡，然后收集悬液进行离心。

刚收到的细胞如更换了培养基或血清，会存在变形的情况，属正常情况，需要一定的适应过程。当体外培养时间增长后，随着传代次数的增多，细胞形态也会有触角、拉丝、变瘦等变化，可能与消化时间和培养条件有关。

可能原因如下：

1. 可能是棉球纤维、凋亡细胞片、血清蛋白，或一些无血清培养基添加因子后的因子析出物，属于正常现象；

2. 如果是传代后细胞堆积成团，肉眼可见白色点状物，则是消化没有吹散开或消化过度导致的细胞抱团自救，建议在细胞密度变高后改善消化过程。

消化过度可能导致部分细胞的细胞膜受损、凋亡，导致细胞生长缓慢。可以用PBS洗掉凋亡细胞后，提高一定血清浓度培养，并且改善消化时间。

· 细菌污染

细菌在普通倒置显微镜下为黑色细沙状，镜下可见黑色的到处乱跑的黑点。细胞一旦出现细菌污染，爆发会很快，培养基很快会出现浑浊，且细胞状态明显变差。

· 真菌污染

一般培养液清亮不变色，镜下有丝状物。有些真菌开始很像死细胞碎片，只是有很多很多的小块很清楚，呈珊瑚状，不像细胞碎片分不清，慢慢会长出很细的黑色丝状物。真菌生长的比较慢，不象细菌那么容易被发现。

实验室较典型的污染真菌是白色念珠菌，它存在于人的口腔和生呼吸道等处。

· 霉菌污染

培养基是清亮的，倒置显微镜下无杂质。在37度孵箱中培养2~3天，仍清亮，但出现絮状杂质，镜下可见明显菌丝。长时间后，细胞虽然仍可生长，但活力状态变差。

· 支原体污染

支原体为黑色小点，培养基一般会浑浊。支原体感染细胞后，细胞病变不明显，只是慢慢死亡。