带你走近细胞生物学世界的第一步——细胞培养

细胞培养的概念：

    细胞培养（cell culture）是指在体外模拟体内环境（无菌、适宜温度、酸碱度和一定营养条件等），使之生存、生长、繁殖并维持主要结构和功能的一种方法。细胞培养也叫细胞克隆技术，在生物学中的正规名词为细胞培养技术。细胞培养技术可以由一个细胞经过大量培养成为简单的单细胞或极少分化的多细胞，通过细胞培养既可以获得大量细胞，又可以借此研究细胞的信号转导、细胞的合成代谢、细胞的生长增殖等。

细胞培养所需的仪器设备：

细胞培养所需的试剂：

细胞培养的类别：

原代细胞(primary cell)是指从机体的组织中经蛋白酶或其它的方法获得、并在体外进行培养的细胞，称为原代细胞。一般认为，培养的原代的第1代细胞和传代到第10代以内的细胞统称为原代细胞培养。

细胞系(cell strain)：原代培养物经胰酶等物质第一次消化传代后即为细胞系，由原先存在于原代培养物中的细胞系所组成。如果不能继续传代，或传代次数有限，可称为有限细胞系，如可以连续培养，则称为连续细胞系，培养50代以上并无限培养下去。

细胞株(cell line)：从细胞系中用单细胞分离培养或筛选的方法，由单细胞增殖形成的细胞群，称细胞株。细胞株的特殊性质或标志必须在整个培养期间始终存在。如果不能继续传代或传代有限，称为有限细胞株；如果可以连续传代，称为连续细胞株。

细胞培养的过程：

细胞复苏：

将冻存的细胞从液氮中取出后，在37℃水浴锅内不断摇动直到*融化后放入离心机中，800rpm-1000rpm，5min，然后在超净台中将上清液弃掉，加入1ml预热的培养基，轻轻吹匀后转移到培养瓶中，补足细胞生长所需的培养基，呈“十"混匀后放入含5%CO₂的细胞培养箱中培养。

细胞传代：

待细胞密度达到80%~90%时，弃去原培养基，用5ml PBS清洗3次。加入一定量含0.25% EDTA的胰蛋白酶，放入细胞培养箱中（不同的细胞消化时间不同）。待细胞消化*后加入胰蛋白酶的3倍体积的含血清培养基进行中和，轻轻吹吸混匀，根据细胞生长特性进行1：2或1：3传代培养。

细胞冻存：

待细胞密度达到80%~90%时，弃去原培养基，用5ml PBS清洗3次。加入一定量含0.25% EDTA的胰蛋白酶，放入细胞培养箱中（不同的细胞消化时间不同）。待细胞消化*后加入胰蛋白酶的3倍体积的含血清培养基进行中和，轻轻吹吸混匀，转移到离心管中800rpm-1000rpm，5min进行离心，然后在超净台中将上清液弃掉，加入1ml冻存液，放入冻存盒内（盒内有异丙醇，以保证梯度降温），立即放入一80℃冰箱内，第二天转入液氮中，可以保存至少两年。

冻存液的配制：70%的*培养基+20%FBS+10%DMSO。

细胞培养中常见的污染及处理办法：

真菌：一般培养基不会变浑浊，保持清亮，显微镜下可观察到丝状物，有的真菌刚开始会像细胞碎片，慢慢会长出黑色丝状物，对细胞的生长有明显的影响。