DNA提取方法简介

发布时间： 2021-10-22　　点击次数： 3552次

一、DNA提取方法简介

1、基因组DNA的提取

1.2、SDS法

SDS法原理

SDS是一种阴离子去垢剂，在高温（55～65℃）条件下能裂解细胞，使染色体离析，蛋白变性，释放出核酸；

提高盐(KAc或NH4Ac)浓度并降低温度（冰浴），使蛋白质及多糖杂质沉淀，离心后除去沉淀；

上清液中的DNA用酚/氯仿抽提，反复抽提后用乙醇沉淀水相中的DNA。

SDS法DNA提取缓冲液

改良的SDS法

水浴 60min, 其间缓慢摇动几次。加入150ul 的5mol/ LKac, 混匀, 冰浴15min 左右。

SDS法流程图（以动物组织为例）

1.3、其它

根据细胞裂解方式的不同有：

根据核酸分离纯化方式的不同有：

吸附材料结合法	硅质材料	高盐低pH值结合核酸，低盐高pH值洗脱。快捷高效。
	阴离子交换树脂	低盐高pH值结合核酸，高盐低pH值洗脱。适用于纯度要求高的实验。
	磁珠	磁性微粒挂上不同基团可吸附不同的目的物，从而达到分离目的。
浓盐法	利用RNP和DNP在盐溶液中溶解度不同，将二者分离
有机溶剂抽提法	有机溶剂作为蛋白变性剂，同时抑制核酸酶的降解作用
密度梯度离心法	利用不同内容物密度不同的原理分离各种内容物

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