难转染细胞Thp-1高效率转染条件分享

Thp-1细胞高效率转染条件分享

一、转染材料准备

1. 转染试剂用量：10ul

2. siRNA浓度：20um/L

3. 细胞密度：1*106-1*105

4. 转染用培养板：6孔板

5. 转染试剂：Advanced DNA RNA转染试剂；货号：AD600150

6. 转染时间：48小时

7. 细胞培养胎牛血清：Z7180FBS-500超低内毒素胎牛血清

8. 细胞冻存液：L0100无血清细胞冻存液.

注意：本细胞转染用量条件不适合lipo使用。

二、操作过程：

1.提前1天接种细胞：细胞汇合度在60-80%左右，再进行转染。

2. 核酸复合物制备：将核酸与转染试剂按照比例关系直接混合，用移液器吹打、混匀，室温静止15分钟。

3.在细胞培养基中加入核酸复合物：根据参考用量在细胞中加入核酸复合物，并轻轻混匀；细胞培养基里面可以含有血清。

4.细胞换液：转染24小时后对细胞进行正常换液，悬浮细胞转染过程中不用换液。

5.分析结果：质粒DNA转染48-72小时后荧光检测转染效率，48-96小时检测mRNA或蛋白表达。若进行稳定表达细胞株的筛选，则在转染后24-48小时左右加入适量的药物进行筛选。siRNA转染后9小时荧光检测转染效率，48-72小时检测mRNA或蛋白表达。