高效率转染THP-1细胞的方法

一、转染条件

转染细胞密度：电讯

培养板：24孔板

转染试剂用量：电讯

质粒DNA用量：电讯

转染试剂：AD600150，Zeta Life Advanced DNA RNA转染试剂

转染时间：48小时

血清：Z7180FBS-500超低内毒素胎牛血清

细胞冻存：CE70100T无血清细胞冻存液

细胞活检测：K009-500，CCK8

二、操作步骤

提前 1 天接种细胞：细胞汇合度在 60-80%左右，再进行转染。

核酸复合物制备：将核酸与转染试剂按照 1:1 关系直接混合，用移液器吹吸 10-15 次混匀，室温静 止 10-15 分钟。

在细胞培养基中加入核酸复合物：根据参考用量在细胞中加入核酸复合物，并轻轻混匀；细胞培养基 里面可以含有血清。

细胞换液：转染 24 小时后对细胞进行正常换液，悬浮细胞转染过程中不用换液。

分析结果：质粒 DNA 转染 48-72 小时后荧光检测转染效率，48-96 小时检测 mRNA 或蛋白表达。若 进行稳定表达细胞株的筛选，则在转染后 24-48 小时左右加入适量的药物进行筛选。siRNA 转染后 9 小时荧光检测转染效率，48-72 小时检测 mRNA 或蛋白表达。