上海中科院药物所高效转染BV-2小鼠胶质瘤细胞的操作方法

上海中科院药物所,使用zeta life公司Advanced DNA RNA转染试剂成功转染BV-2小鼠胶质瘤细胞，其转染条件和操作方法分享如下：

一、转染条件：

细胞密度：60左右

质粒DNA浓度：700ng/ul

质粒DNA大小：6500bp

培养板：24孔板

转染试剂用量：电讯

质粒DNA用量：电讯

转染时间：48小时

二、操作方法：

提前 1 天接种细胞：细胞汇合度在 60-80%左右，再进行转染。

核酸复合物制备：将核酸与转染试剂按照 1:1 关系直接混合，用移液器吹吸 10-15 次混匀，室温静 止 10-15 分钟。

在细胞培养基中加入核酸复合物：根据参考用量在细胞中加入核酸复合物，并轻轻混匀；细胞培养基 里面可以含有血清。

细胞换液：转染 24 小时后对细胞进行正常换液，悬浮细胞转染过程中不用换液。

分析结果：质粒 DNA 转染 48-72 小时后荧光检测转染效率，48-96 小时检测 mRNA 或蛋白表达。若 进行稳定表达细胞株的筛选，则在转染后 24-48 小时左右加入适量的药物进行筛选。siRNA 转染后 9 小时荧光检测转染效率，48-72 小时检测 mRNA 或蛋白表达。