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从海胆和沙币等无脊椎动物系统获取配子的实验方法
发布时间： 2021-11-16 点击次数： 817次材料与仪器
海胆和沙币
KCl 溶液 3-氨基-1 2 4-三唑
巴斯德吸管 Nytex 滤器步骤
一、海胆和沙币体腔内注射 0.5 mol/L 的 KCl
1. 制备 0.5 mol/L 的 KCl 溶液。
2. 用海水冲洗一下动物以去掉颗粒物质。
3. 用一个 23~26 号的针头向动物的口缘空腔内注射多达 500 μl 或 100 μl KCl。
4. 用巴斯德吸管收集“干"（米青）子，并储存于置于冰上的小塑料管中。‘
5. 将雌性动物在一杯海水中翻过来收集卵子。
6. 用 Nytex 滤器洗卵子，以去掉颗粒，并使卵子吸附到滤膜上。
7. 通过将水吸走或小心倒掉，再加入洁净的海水将卵子洗几遍。
二、海胆的电刺激
1. 将海胆反口面向上放在纸巾上。
2. 将两个电极一边一个放在接近生殖管的贝壳部位，配子就会从生殖孔中释放出来。
3. 如果需要，在生殖管周围的几个部位通以电流。
4. 开始收集卵子和（米青）子，并受精。
三、海胆和沙币卵的受精
1. 制备稀释的（米青）子悬液。
2. 向洗过的卵中加入（米青）子。
四、受精膜的去除
1. 获取卵子。
2. 将卵子重悬于含有 1mmol/L 3-氨基-1,2,4-三唑的海水中。
3. 受精。
4. 当受精膜出现后，将卵子倒入直径比卵子小几微米的 Nytex 网中。
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