细胞培养常遇问题集锦（六）

26、

▲问：有时候细胞和细胞之间就会出现这种小黑点，高倍镜下看少数在原地打转，但是培养液不浑浊。那其中不会动的是细菌吗？

答：原地打转的可能为黑胶虫，会动的是细菌，细菌有鞭毛。黑胶虫是一种现象，身份可能是细菌，有鞭毛会游动。

27、

问：想问一下，已经使用三抗以及抗支原体的药物培养细胞一周，但还是有少量黑胶虫，但细胞生长状态还好，这样的话接下来还需要处理嘛？好像有一种有少量黑胶虫但不影响细胞状态可以不做处理的说法？

答：一周，黑胶虫数量减少，已经见效了，但还是要继续处理，因为黑胶虫和细胞有此消彼长的特点，细胞复苏或刚传代时，因为此时细胞状态差，所以特别容易爆发黑胶虫，黑胶虫数量增多，当细胞复苏率增强时，黑胶虫数量会减少。

28、

问：话说养细胞的时候，一直加双抗，会对哪些实验有影响呢？之前听说做干扰的时候，要撤双抗。

答：一般做功能学实验，药理学，毒理学，信号通路都要撤掉双抗。

29、

问：Cho传代接种密度0.4 e5，4天才长到11e5，是怎么回事？DT从16.5变成20了。一直都用的一样的培养基，是不是冻溶会影响？是cho细胞，摇瓶培养。

答：检查一下营养体系是不是不适合，如不是，那就考虑是胰酶消化这一步是不是有问题。你这边是把cho贴壁驯化成悬浮了。

30、

问：请问怎么培养破骨细胞？怎么提取到培养的protocol？遇到一个情况，怎么消化也消化不下来，想从源头找一找，是什么原因？

答：破骨细胞的培养方法主要有：骨髓机械分离法，骨髓细胞诱导法，脾干细胞诱导法，血液单核细胞诱导法，小鼠RAW264.7细胞系诱导法及骨巨细胞瘤分离法。

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