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大鼠星型胶质细胞培养实验——胰酶消化法
发布时间： 2021-12-05 点击次数： 1064次材料与仪器
SD大鼠
苯巴（匕匕）妥 解剖液 胰蛋白酶 Dnase DM培养液
离心管 培养箱 手术器材步骤
一、 取14.5d SD大鼠一只。
二、 苯巴（匕匕）妥0.5 ml 腹腔注射，待麻醉后置于手术台上，酒精棉球消毒皮肤，开腹取出子宫（约12-14个），放入解剖液中，剖开子宫，取出胚胎，放入解剖液中，在耳眼之间离断，取头侧部组织，去除脑膜组织，取原始中脑区组织，放入离心管装的解剖液中，待全部取出后，1500转2分钟。
三、 用吸管吸出上清液，在组织细胞沉淀中加入胰蛋白酶一管（1 ml/vial），室温30分钟，1500转，离心5分钟（离心前可加入解剖液以终止胰酶作用）。
四、吸去上清，在组织细胞沉淀中加入Dnase 一管（2 ml/vial），37℃反应10分钟，1500转，离心5分钟，吸去上清，在组织细胞沉淀中加入2 ml DM培养液吹打，计数（计数公式为（N1+N2+N3+N4）/4x104），以3x105个/瓶在培养瓶中培养，做好标记（时间、原代的还是第几代传代，姓名，细胞名称等），放入培养箱中培养。- 下一篇：细胞培养常遇问题集锦（十二）
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