如何选择细胞培养用液和使用注意事项

1、如何正确选择培养基种类？

引用几款比较经典的培养基举例：

2、如何选用特殊细胞系培养基？

培养某一类型细胞没有固定的培养条件。在 MEM 中培养的细胞，很可能在 DMEM 或 M199 中同样很容易生长。总之，首先选 MEM 做粘附细胞培养，RPMI-1640 做悬浮细胞培养是一个好的开始。

3、什么培养基中可以省去加酚红？

酚红在培养基中被用来作为 PH 值的指示剂：中性时为红色，酸性时为黄色，碱性时为紫色。研究表明，酚红可以模拟固醇类激素的作用（特别是雌激素）。为避免固醇类反应，培养细胞，尤其是哺乳类细胞时，用不加酚红的培养基。由于酚红干扰检测，一些研究人员在做流式细胞检测时，不使用加有酚红的培养基。

4、细胞培养基的配制和储存应该注意什么？

细胞培养基配好后，要先抽取少许放入培养瓶内在37℃培养箱内放置24~48h，已检测培养液是否有污染，然后方可用于实验。配置培养基所需的血清要合格并且保持稳定。一个批号试用效果良好后，就可一次购入较多同一批号的血清，这样实验条件稳定，配液时调整pH值较容易。每次配液量以使用两周左右的量为宜，一次配液不要太多，一是短期内用不完造成营养成分损失需要补充，二是量大易造成污染。

5、为何培养基保存于 4 ℃ 冰箱中，颜色会偏紫色？

培养基保存于 4 ℃ 冰箱中，培养基内的 CO2 会逐渐溢出，造成培养基越来越偏碱性，而培养基中的酸碱指示剂 （通常为 phenol red） 的颜色也会随碱性增加而更偏紫色。培养基偏碱的结果， 将造成细胞生长停滞或死亡。若培养基偏碱时，可以通入无菌过滤 CO2，以调整 pH 值。

6、什么情况下用到无血清培养基？

对于应用培养细胞进行分离制备细胞生长因子、单克隆抗体等应该选择无血清培养基。

7、如何选择正确的血清种类？

8、可否使用与原先培养条件不同的血清种类？

不能。血清是细胞培养上一个极为重要的营养来源，所以血清的种类和品质对于细胞的生长会产生极大的影响。来自不同物种的血清，在一些物质或分子的量或内容物上都有所不同，血清使用错误常会造成细胞无法存活。

9、血清灭活是否必须？

一般情况下不建议。热灭活是以 56℃，30 分钟来处理已解冻的血清，因为此加热步骤，可以使补体去活化，而补体所参与的反应有：溶细胞活性，平滑肌的收缩，肥大细胞和血小板组胺的释放，增强吞噬作用，淋巴细胞、巨噬细胞的趋化和激活。

实验显示，经过正确处理的热灭活血清，对大多数的细胞而言是不需要的。经此处理过的血清对细胞的生长只有微小的促进，或*没有任何作用，甚至通常因为高温处理影响了血清的质量，而造成细胞生长速率的降低。而经过热处理的血清，沉淀物的形成会显著的增多， 这些沉淀物在倒立显微镜下观察，像是 "小黑点"，常常会让研究者 误以为是血清遭受污染，而把血清放在 37C 环境中，又会使此沉淀 物更增多，使研究者误认为是微生物的分裂扩增。因此除了做免疫学相关实验和培养一些特定细胞，如平滑肌细胞、胚胎干细胞等，不需要做热灭活处理。

10、培养基中是否添加抗生素？

除特殊筛选系统中外，一般正常培养状态下，培养基中不应添加任何抗生素。

11、何时更换培养基？

视细胞生长密度而定，或遵照细胞株基本数据上的更换时间，按时更换培养基即可。