测定用乙醇固定的 DNA 的含量

材料与仪器

细胞样品
PBS缓冲液 70%乙醇 PI液
离心机 恒温箱 筛网

步骤

一、培养细胞的 DNA 含量的测定

制备单细胞悬液于 200μ l 的 PBS 缓冲液中； 加入 2ml 预冷的 70%乙醇，4℃保存；

1. 取单细胞悬液 1——2×106 个细胞于 PBS（PH=7.2）缓冲液中；

2. 300g 离心 5 分钟，弃上清，反复两次；

3. 重悬细胞于 0.5ml PBS 缓冲液中；

4. 将细胞悬液放置于 2——3ml 冷 70%乙醇中，混匀，保存于4℃，至少30 分钟。 在 4℃条件下可保存 2——3 周。

2、新鲜组织的 DNA 含量的测定

1. 用 200mg 湿重组织用机械法制成单细胞悬液；

2. 500g 离心 5 分钟；

3. 弃上清，重悬于 10ml 染色- 去污剂中；

4. 再过滤，用 200 目的筛网或 70——80μm 的筛网过滤；

5. 上机检测。

3、石蜡包埋组织切片的 DNA 含量的测定

1. 从石蜡包埋切取切片 50 μ m 厚，2——3 片，制成单细胞悬液；

2. 用 PBS 缓冲液洗涤，500g 离心 5 分钟，弃上清；

3. 加入 PI 液 1ml 室温避光 30 分钟；

4. 调整细胞浓度为 1×106/ml；

5. 上机检测。

注意事项

1. 根据实验的要求，固定剂也可选用 1——3%多聚甲醛;

2. 将乙醇作为固定剂时，乙醇应预冷至 0——4℃;

3. 细胞在固定时，固定剂应缓慢滴入细胞悬液中，使固定剂的浓度缓慢增 加，并不断震摇，以免细胞成团（特别是用乙醇固定时） .

常见问题

如果想要检测样品的纯度,那么还要再测一次280nm处OD值,计算二者的比率,若比率接近2，说明样品纯度较高。