-
乙醇沉淀法
发布时间： 2021-12-17 点击次数： 3843次原理
DNA 溶液是DNA以水合状态稳定存在，当加入乙醇时,乙醇会夺DNA周围的水分子，使DNA失水而易于聚合。一般实验中,是加2倍体积的无水乙醇与DNA相混 合,其乙醇的最终含量占67%左右。因而也可改用95%乙醇来替代懈水乙醇(因为无水乙醇的价格远远比95%乙醇昂贵)。但是加95%的乙醇使总体积增大,而DNA在溶液中有一定程度的溶解,因而DNA损失也增大,尤其用多次乙醇沉淀时,就会影响收得率。折中的做法初次沉淀DNA时可用95%乙醇代替无水乙醇,最后的沉淀步骤要使用无水乙醇。也可以用0.6倍体积的异丙醇选择性沉淀DNA.一般在室温下放置15-30分钟即可。
材料与仪器
DNA
乙酸钠 乙醇
EP管 低温离心机 移液器 -70度冰箱步骤
1. 酶切前确定待切样品的浓度, 并选择合适的限制性内切酶和配套Buffer。2. 在离心管中加入如下成分：10xBuffer 1ul待切样品 xul酶 0.5-1ul______________________加水补足10ul3. 混匀样品并短暂离心使样品沉于管底。4. 将离心管置于37℃中温育1-3hr，若待切样品为PCR 产物，则可将反应时间适当延长。5. 用未酶切的质粒作为对照，琼脂糖电泳鉴定酶切结果。注：当酶切样品用于回收而不是鉴定时，可按比例适当加大反应体积。双酶切可选用二者活性都较高的Buffer 或者通用Buffer，但要注意不能有星反应。注意事项
移去上清液时需要缓慢操作，以免将DNA样品弄出。
常见问题
乙醇可以任意比和水相混溶,乙醇与核酸不会起任何化学反应,对DNA很安全,因此是理想的沉淀剂。
以上就是本期的内容，更多资讯，欢迎关注安培生物科技有限公司了解更多技术与产品资讯。
安培生物科技有限公司介绍：
安培生物坚持为生命科学研究、活体动物转染、大规模生物生产、基因和细胞治疗领域客户，提供*细胞体内可代谢的核酸转染试剂；inviCELL™Platelet lysate无动物血清产品旨在支持广泛的细胞扩增和生产，包括培养间充质干细胞和多种免疫细胞系等，为制药公司或者生物技术公司提供无血清细胞培养规模生产服务；提供以植物生物为平台基因序列全人源化、*的细胞培养可分解3D基质胶产品；提供內毒素≦ 1.0 EU/mL、对细胞无毒性影响、高纯度的一型胶原蛋白产品。安培生物专注为生物医药领域提供优质的产品和技术服务，努力发展为基因治疗、细胞治疗的生物科技企业。
- 下一篇：cDNA文库构建
- 上一篇：测定用乙醇固定的 DNA 的含量
销售热线
