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原代细胞转染试剂的转染效率受何因素影响？
发布时间： 2022-01-05 点击次数： 911次细胞转染是指将外源分子如DNA、RNA等导入真核细胞的技术。随着分子生物学和细胞生物学研究的不断发展，转染技术已成为研究和控制真核细胞基因功能的常规工具。在研究基因功能、调控基因表达、突变分析和蛋白质生产等生物学试验中，其应用越来越广泛。原代细胞转染试剂可转染极度难转染的免疫细胞、悬浮细胞，如T细胞、NK细胞、人淋巴细胞、THP-1等；可高效率转染siRNA到任何哺乳动物细胞。用于将DNA和siRNA转染到真核细胞系和各种原代细胞中；转染细胞后可10小时内快速代谢的第三代新转染试剂。原代细胞转染试剂的转染效率受以下因素影响：1.细胞培养物健康的细胞培养物是成功转染的基础。不同细胞有不同的培养基，血清和添加物。低的细胞代数能确保基因型不变。高的转染效率需要一定的细胞密度，一般的转染试剂都会有专门的说明。推荐在转染前24小时分细胞，这将提供正常细胞代谢，增加对外源DNA摄入的可能。一定要避免细菌，支原体或真菌的污染。2.血清大多数培养基在使用前需要加血清。胎牛血清经常用到，便宜一点的有马或牛血清。通常的，血清是一种包含生长因子及其它辅助因子的不确切成分的添加物，对不同细胞的生长作用有很大的差别。血清质量的变化直接影响转染效率。因此在转染前建议先测(转右)试出对细胞生长良好的血清批号，转染时用同一批号的血清，并同时做负对照以测试细胞生长是否正常。有些转染技术如脂质体转染在有血清存在情况下效率很低，因此在转染前要除血清。但有些对此敏感的细胞如原代细胞会受到损伤，甚至死亡导致转染效率极低。3.载体构建转染载体的构建也影响转染结果。病毒载体对特定宿主细胞感染效率较高，但不同病毒载体有其特定的宿主，有的还要求特定的细胞周期，如逆转录病毒需侵染分裂期的宿主细胞，此外还需考虑一些安全问题。除载体构建外，载体的形态及大小对转染效率也有不同的影响，如前面提到的超螺旋及线性DNA对瞬时和稳定转染的影响。如果基因产物对细胞有毒性作用，转染也很难进行，因此选择组成或可调控，强度合适的启动子也很重要，同时做空载体及其它基因的相同载体构建的转染正对照可排除毒性影响的干扰。4.DNA质量DNA质量对转染效率影响非常大。一般的转染技术基于电荷吸引原理，如果DNA不纯，如带少量的盐离子、蛋白、代谢物污染都会显著影响转染复合物的有效形成及转染的进行。5.转染技术转染技术的选择对转染结果影响也很大，许多转染方法需要优化DNA与转染试剂比例，细胞数量，培养及检测时间等。
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