细胞培养的注意事项

取出冷冻管后，须立即放入37 C水槽中快速解冻，轻摇冷冻管使其在1分钟内全部融化，并注意水面不可超过冷冻管盖沿，否则易发生污染情形。另冷冻管由液氮桶中取出解冻时，必须注意安全，预防冷冻管之爆裂。

除少数特别注明对DMSO敏感之细胞外，绝大部分贴壁细胞株，在解冻之后，应直接放入含有12-16ml新鲜培养基之培养角瓶中，待隔天再置换新鲜培养基以去除DMSO即可，悬浮细胞可先离心去掉DMSO，如此可避免大部分解冻后细胞无法生长或贴附之问题。

不能。每一个细胞株均有其特定使用且已适应之细胞培养基，若骤然使用和原先提供之培养条件不同之培养基，细胞大都无法立即适应，造成细胞无法存活或者老化空泡现象，如一定要替换，建议驯化，按照血清的驯化方式操作即可。

需要按比例驯化，新旧血清比为：3：2，1：2，1：3直到*更替。血清是细胞培养上一个极为重要的营养来源，所以血清的种类和品质对于细胞的生长会产生极大的影响。来自不同物种的血清，在一些物质或分子的量或内容物上都有所不同，血清使用错误常会造成细胞无法存活。

一般培养基中大都使用HCO3-/CO32-/H+作为pH的缓冲系统，而培养基中NaHCO3的含量将决定细胞培养时应使用的CO2浓度。当培养基中NaHCO3含量为每公升3.7 g时，细胞培养时应使用10% CO2；当培养基中NaHCO3为每公升1.5 g时，则应使用5% CO2培养细胞。

视细胞生长密度而定，整体50%以下2-3天更换一次培养基，整体密度50%以上一天更换一次或遵照细胞株基本数据上之更换时间，按时更换培养基即可。

一般使用之trypsin-EDTA浓度为0.05% trypsin-0.53m MEDTA.4 Na。第一次开瓶后应立即少量分装于无菌试管中，保存于–20 C，避免反复冷冻解冻造成trypsin之活性降低，并可减少污染之机会。

一般仅需持续加入新鲜培养基于原培养角瓶中，稀释细胞浓度即可，若培养液太多时，可将培养角瓶口端稍微抬高，直到无法容纳为止。分瓶时取出一部分含细胞之培养液至另一新的培养角瓶，加入新鲜培养基稀释至适当浓度，重复前述步骤即可。

依照细胞株基本数据和细胞的生长情况传代，若第一次接种不了解细胞的基本特征，建议1：2传代，后续观察细胞特点，若1-2天即可达到密度80%以上建议1：3或以上。传代的时候请注意：细胞数太少或稀释得太多亦是造成细胞无法生长之一重要原因。

欲回收动物细胞，其离心速率一般为300xg (约1,000rpm)，5 - 10分钟，过高之转速，将造成细胞死亡。