一．RAW264.7细胞背景介绍
细胞取材于Abelson小鼠白血病病毒诱发的肿瘤组织，是科研上尤为常用的炎症细胞模型之一。该细胞易于增殖，有高效DNA转染力，对RNA干扰敏感，常用作转染宿主细胞和复制小鼠诺如病毒。细胞有sIg-、Ia-、Thy-1.2抗原阴性。据报道，该细胞建系后已不分泌且检测不到病毒颗粒，XC斑点形成实验阴性。可以抗体依赖性地分解绵羊红血球与肿瘤靶细胞，LPS或PPD处理2天后可诱导分解红血球但对肿瘤靶细胞无作用。
二．RAW264.7细胞形态特征
1、RAW264.7细胞一般为圆形或椭圆形，细胞核为圆形或椭圆形，染色较深。贴壁特别牢固。若细胞呈多角形时，细胞为激活状态。
2、RAW264.7具有吞噬能力，当细胞吞噬抗原后，细胞会释放趋化因子，进一步促进细胞伸出伪足，增强粘附攀爬能力。若细胞吞噬抗原过多、培养环境恶劣，细胞刚传完代比较稀疏的时候，都会让该细胞呈现梭形、长梭形，镜下会看到具有细长伪足的小细胞被类似上皮的梭形细胞。
3、这个细胞属于慢热型的，很难消化，消化时间不够则导致细胞无法消化下来，消化时间太长，传代之后就会长个角给你看看，使劲吹打和细胞刀刮下来，则传代之后不只是长个角给您看看了，还会飘起很多小黑点，而且这种细胞传代时接种密度要大，否则也容易使巨噬细胞分化，细胞变形，并且不能恢复，这是培养这种细胞时最需要注意的问题。
4、RAW264.7细胞生长时喜欢结伴。正常生长状态应该是一小片一小片的生长，片片之间不连接，等到长到更多更密的时候会连成大片，并叠加成层。叠加成层的细胞需要更多的营养，一旦营养跟不上，细胞也会长个角给你瞅瞅，所以需要在细胞叠加的时候进行操作。
5、RAW264.7细胞传代后贴壁迅速，半小时就能贴上一大片，刚贴壁是细胞呈圆形，折光度很好，镜下观察如小珍珠状一个个地散落于瓶底面。若这个时候觉得活化的细胞较多，即长梭形的细胞较多时，可在细胞传代消化重新贴壁半小时后进行换液，只保留生长状况较好的细胞。
6、RAW264.7细胞的生长对血清要求比较高，血清不好会导致细胞生长情况变差。这是一个大胃王，所以在看到培养基变黄的时候不要迟疑，立马换液处理。
1、培养之前，一切与细胞接触的玻璃器皿和器具都要进行热源处理。（200-250℃烘烤4-6h）
我们的消化及传代方法：
方法一、消化液：0.5%胰酶、0.2EDTA，实验前加温到37℃以T25培养瓶为例：
1、细胞贴壁生长，长满瓶底的95%时，弃去培养液，加D-HANKS漂洗两次；
2、加入胰酶和EDTA的消化液1-2ml，消化37℃约2-5min，镜下可看见细胞基本脱落即终止消化，收集消化后的细胞；（因为底层的细胞一般长有伪足，它紧紧的贴在瓶壁上，更难消化，消化时可先收集上层细胞，然后再消化底层细胞，每次消化下来的细胞不能放在同一瓶里）。
3、加入D-HANKS漂洗两次，加入胰酶和EDTA的消化液1-2ml，37℃消化约2-5min，继续消化底层的细胞，镜下可看见细胞基本脱落即终止消化，单独收集消化后的细胞；
4、加入新培养液10ML轻轻弹散混悬细胞，按需要分入新的培养瓶中，37℃CO2培养箱，几小时后即可贴壁。
四、冻存的注意事项：
1、RAW264.7的冻存过程应尽量减少热源对细胞的影响，这样对细胞种子的洁净度有更好的保障。
2、这种细胞对空间状态很敏感，所以复苏的细胞密度或复苏细胞数量控制在10^4-10^5为宜，这种接种密度接种在75cm2培养瓶中养2天后细胞密度即可到达70-80%，若细胞在复苏的时候有伪足，先让细胞生长到堆叠起来，然后再进行传代，底部细胞弃掉，尽量选择好的血清培养，可让新生细胞慢慢达到未激活状态。
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