碱裂解法质粒抽提试剂盒的原理是什么？

这次讲解碱裂解法，从大肠杆菌中抽提质粒的基本原理。

我们将摇菌得到的混合物离心，去除培养基，就可以获得大肠杆菌，加入溶液1重悬。溶液1含缓冲成分，和抑制Dnase的EDTA。加入溶液2，含NaOH和SDS。在强碱环境下，细菌的细胞壁和细胞膜被破坏，释放出基因组DNA和质粒DNA。此时基因组DNA双螺旋结构被破坏，发生变性。质粒DNA也会发生变性，但两条互补链仍会互相盘绕，并紧密的结合在一起。

当加入溶液3（含醋酸钾溶液）使pH恢复中性时，共价闭合环状质粒DNA复性快，而线性的染色体DNA复性缓慢，细菌蛋白质、破裂的细胞壁和变性的染色体DNA会相互缠绕成大型复合物，被十二烷基硫酸盐包盖，从溶液中有效地沉淀下来。经过离心除去变性剂后，就可以从上清中回收复性的质粒DNA。

质粒抽提试剂盒中，通常还有 DNA吸附柱，将质粒DNA吸附，其他的杂质被洗去。最后用洗脱液，将质粒DNA洗脱下来。

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