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免疫细胞转染实操时的几大步骤说明
发布时间： 2022-10-09 点击次数： 653次对于免疫细胞转染实验，我们拿脂质体为例，其作为体内和体外输送载体的工具，已经研究的十分广泛，中性脂质体是利用脂质膜包裹DNA，借助脂质膜将DNA导入细胞膜内。带正电的阳离子脂质体，DNA并没有预先包埋在脂质体中，而是带负电的DNA自动结合到带正电的脂质体上，形成DNA-阳离子脂质体复合物，从而吸附到带负电的细胞膜表面，经过内吞被导入细胞。具体实操时的步骤如下：1.细胞培养：取6cm细胞皿，向每孔中加入2mL含1~2×105个细胞培养液，37℃二氧化碳培养密度至40%~60%，密度过大，转染后不利筛选细胞。2.转染液在EP管中制备(为转染每一个孔细胞所用的量)：A液：用不含血清培养基稀释1ug质粒DNA；B液：用不含血清培养基稀释2ul脂质体。分别将A液与B液轻弹混匀，静置5分钟。3.吸取B液加入至A液中，轻弹混匀。室温中置10-15分钟。4.转染准备：用1mL不含血清培养液漂洗两次，再加入4mL不含血清培养液。5.转染：把A/B复合物缓缓加入培养液中，摇匀，37℃恒温箱置6~24小时，吸除无血清转染液，换入正常培养液继续培养。6.瞬时转染后，可在48-72h细胞长满之后，提取细胞蛋白或者RNA，验证敲减/过表达效率。- 下一篇：为什么细胞培养需要用到胎牛血清？
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