大鼠平滑肌细胞的贴壁培养方法

贴壁法：

器械
显微器械：眼科剪一把，直弯眼科镊各一把，细结镊一把，手术刀一把，针头诺干
杀老鼠器械：手术剪一把，大镊子一把，弯眼科镊一把，组织钳一把，50ml烧杯一个（锡纸包好）
另外：10ml离心管两个，培养皿两个，10ml的瓶子三个，小滤器两个，硅胶板一块，培养瓶盖子诺干
贰。试剂
D-HANKS液250ml，双抗2ml（青霉素16万U/ml链霉素15万U/ml）。FBS和含20％FBS的DMEM
叁。步骤
1． 取大鼠，称重，水合氯醛0。3ml/100g腹腔麻醉
2． 绑好大鼠，先剪开腹腔，剪断腹部大动脉放血，后剪开胸腔，取肺
3． 放入烧杯，后移入超净台，置于冰盒上。以后的操作皆在冰盒上操作
4． 倒入已加双抗的D-HANKS，清洗肺部，扯掉食管，剪掉心脏
5． 用针头将肺固定在硅胶板上，硅胶板置于培养皿里
6． 用镊子将肺的内外膜除去，只剩下平滑肌
7． 用眼科剪将肺部剪成1－2mm的小碎块
8。在培养瓶中加入一到两滴的FBS，轻摇培养瓶，使血清铺满瓶底。
9。用眼科剪将碎块放进瓶中，后用滴管将碎块在瓶里铺均匀。
10。将瓶底朝上，放入培养箱中
11。四个小时后，将瓶子翻回
这样处理后，一般五天内不用看它，第六天开始，可以加入含20％FBS的DMEM

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