细胞污染如何识别？

在培养细胞过程中，同学们最担心的就是细胞污染。因此，今天给大家分享如何辨别细胞污染的经验，赶快学起来吧~

一、肉眼观察

把培养瓶或培养皿拿起来，对者光线检查

●浑浊情况：即使细胞密度很高，培养基也应该是透明的。轻轻移动或晃动培养瓶，观察培养基的浑浊或悬浮情况，一些霉菌可能会在培养基的表面形成菌落。

●培养基颜色的变化。酸性条件下，加了酚红的培养基会由红变黄，而碱性条件下会变成红紫色。细菌污染常常会使培养基变成黄色，真菌污染会使培养基变成深紫红色。

注意：丢掉细胞以前要仔细检查一下，快速生长和生长过量的细胞培养基也会变黄。当培养箱中CO2的浓度变化时培养基的颜色也会变成黄色（CO2浓度太高）或是粉红色（CO2 浓度太低）。

●闻！当然不能打开瓶子去闻，把鼻子贴在瓶口闻，许多污染发生以后都会散发出易察觉的、特殊的气味，甚至打开培养箱门就闻到了。

二、显微观察

在倒置显微镜下，先用低倍（10x）再用高倍（40x）物镜（总放大倍数为400）观察细胞培养皿或培养瓶中的细胞：

●其他有机体：在低倍镜下，真菌的菌丝体成长棒状，并横穿整个视野，还可以观察到酵母，有时呈小圆球形，有时还有芽。

在高倍镜下可以观察到细菌，它们可能是棒状或球状，单独成链或成团存在，它们也可能和细胞混在一起，并且明显处于细胞内部，有些细胞可能已经裂解变得模糊。观察时可能每两个视野才出现一个污染（当然也算被污染了！），而且可能污染物是可以运动的。

●损伤细胞：感染会杀死细胞，可能导致每个细胞都裂解/细胞层从附着物上全剥离，更可能的是细胞变得不规则（或大或小），在低倍镜下是黑色的粒状。

（1）悬浮细胞

悬浮培养细胞比贴壁培养细胞更加难以显微观察，尤其是高倍显微镜下。

●将培养瓶或培养皿放在显微镜的载物台上，静置一会。将焦距对准器皿的底部，观察那些轻微附着的细胞，因为它们可能已经接触到了微生物。

●对准整个培养瓶焦距， 当发现细胞的时候，用细聚焦调节旋钮调节，仔细检查周围的培养基有没有污染发生。

（2）贴壁细胞

三、制片观察法

如果你不能确定是否发生了污染

●制作湿涂片或染色片：取1 ml培养基离心，用50μl培养基或缓冲液重新悬浮细胞，滴一滴到载玻片，盖上盖玻片制成湿涂片；或涂片、固定并染色（甲基兰或革兰氏染液），在高倍镜下观察。

●将细胞在营养培养基或血琼脂培养基上划线，37℃培养3天。如果有菌落，那么细胞被污染了。

●取1 ml的细胞培养液至无菌的微量离心管中，37℃培养3天。观察到浑浊物，做湿涂片显微镜观察。

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