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混合淋巴细胞增殖
发布时间： 2023-01-11 点击次数： 853次简介
混合淋巴细胞增殖实验也称混合淋巴细胞培养（MLC）或称混合淋巴细胞反应（MLR），常用于器-官-移-植前的组织配型，以测定受体和供体主要组织相容性抗原（HLA 抗原）相容的程度。
材料与仪器
器材：细胞培养瓶、培养板、吸管等、CO2 细胞培养箱、超净台。试剂：① 10％FCS-RPMI 1640 培养基 ;② 细胞 DCs 细胞、反应细胞、外周血单个核细胞。③ 3 H-TdR 工作液步骤
混合淋巴细胞增殖实验的基本过程可分为如下几步：（一）刺激细胞（DCs）的制备A. 取健康志愿者肝素抗凝的外周血，淋巴细胞分离液分离单个核细胞B. 以 10％ FCS-RPMI 1640 悬浮细胞置培养瓶中，37℃、5％ CO2 培养 2 小时，轻轻翻过培养瓶，弃掉培养上清，将非贴壁细胞弃掉，即得贴壁的单核细胞C. 补加 10％ FCS-RPMI 1640 同时加入 20 ng/ml 的 hGM-CSF，500 IU/ml 的 IL-4，培养至第 7 天，收集悬浮细胞，即为 DCsD. 刺激细胞经 25 μg/ml 的丝-裂-霉-素 C 或 2000 rad y-射线照射处理使刺激细胞失去增殖能力。（二）反应细胞的制备A 取健康人外周血制备单核细胞，PBS 洗 3 次后，37℃、5％ CO2 贴壁 2 小时，收集悬浮细胞，作为反应细胞B 以 RPMI 1640 培养液重悬，调整细胞浓度至 1x106 个/ml。（三）混合淋巴细胞反应A 将刺激细胞调整浓度分别为 1x106、5x105、2x10、1x105、5x104 个/ml， 10％FCS-RPMI 1640 培养于 96 孔培养板中，每浓度设立 3 孔，100μL/孔B 将反应细胞浓度按 1x106 个/ml 每孔分别加入上述各孔中，100μl/孔C 同时设立刺激细胞对照组（不同浓度刺激细胞 100μl＋培养液 100μl）和反应细胞对照组（反应细胞 100μl＋培养液 100μl）D 37℃，5％ CO2 培养 5 天后，3 H-TdR 掺入率检测反应细胞的增殖水平。注意事项
1. 实验中注意无菌操作2. 如作单向混合淋巴细胞实验，则刺激细胞接受照射剂量要准确，使细胞暂时存活，但失去增殖的能力。以上就是本期的内容，更多资讯，欢迎点击安培生物网站链接了解更多技术与产品资讯。
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