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Brachet反应显示细胞中DNA和RNA
发布时间： 2023-01-13 点击次数： 1472次简介
Brachet 反应显示细胞中 DNA 和 RNA 是利用了 DNA 和 RNA 这种结构上的差异，采用不同的染料同时显示两者在细胞中的分布情况。原理
Brachet 反应显示细胞中 DNA 和 RNA 的基本原理是利用了 DNA 和 RNA 这种结构上的差异，采用不同的染料同时显示两者在细胞中的分布情况。甲基绿、派洛宁（methyl green，pyronin）为带有正电荷的碱性染料（结构式见图3-2），可与带有负电荷的核酸分子结合，两种染料的作用具有选择性，甲基绿带有2 个 正电荷，易与双链的 DNA 分子结合，使其显示蓝绿色；派洛宁带有1 个 正电荷，易与单链的 RNA 分子结合，使其显示红色。也有人认为其染色原理与 DNA 和 RNA 分子的不同聚合程度有关。细胞经甲基绿-派洛宁混合液处理后，其 DNA 和 RNA 出现不同的显色反应，以此可对细胞中的DNA、RNA进行定位、定性和定量分析。
材料与仪器
器材：
尖头镊子、染色缸、盖片、载玻片、吸管、吸水滤纸、普通光学显微镜、CO2 培养箱、 HeLa 人宫颈癌上皮细胞。
试剂：①0.01 mol ／L PBS（pH 7.2）（36 mL 0.2 mol ／ L 磷酸氢二钠液14 mL 0.2 mol ／L 磷酸二氢钠液加双蒸水至1000 mL 。混匀，待完-全溶解分装，经高压灭菌后保存于4 ℃ 冰箱备用。）②Carnoy 固定液（甲醇:冰醋酸＝3:1）③甲基绿-派洛宁混合液④蒸馏水⑤丙酮⑥二甲苯⑦中性树胶步骤
Brachet 反应显示细胞中 DNA 和 RNA 的基本过程可分为如下几步：A.将培养的 HeLa 细胞接种于盖片，24～48 h 后生长为单层。B.取细胞盖片1 张 ，用 PBS（pH7.2）漂洗3 次 ，吸水滤纸吸去液体。C.放入 Carnoy 固定液中固定30 min 。D.向盖片滴加甲基绿-派洛宁混合液，染色30 min 。E.蒸馏水轻轻漂洗2～3 次 （每次2～3 s ），滤纸吸去多余水分。F.盖片浸入丙酮中分色2～3 s 。G.浸入丙酮-二甲苯（1:1）中5 s 。H.浸入纯二甲苯中透明5 min 。I.滴1 滴 中性树胶于载玻片上，将盖片细胞面朝下封片。J.镜下观察。以上就是本期的内容，更多资讯，欢迎点击安培生物网站链接了解更多技术与产品资讯。
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