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细胞伤口愈合
发布时间： 2023-01-16 点击次数： 862次原理
在单层培养细胞间制作划痕以产生愈伤区域，然后监控该伤口周围细胞的向划痕迁移的现象，即伤口愈合。改变细胞迁移和/或生长的因素可以增加或降低伤口愈合率。该方法可以定量，适用于自动化系统高通量筛选。材料与仪器
人MDA-MB-231细胞
DMEM培养基 胎牛血清 PBS 戊二醛 乙醇 结晶紫
24孔培养板 枪头 细胞培养仪步骤
1.细胞在含有10%FBS的DMEM培养基中生长。
2.细胞以一定密度接种到24孔细胞培养板中，生长24小时后，单层细胞融合度应达到70-80%。
3.不要更换培养基。用新的1ml枪头轻轻的在单层培养细胞间划痕，划痕横穿过孔，枪头尽量与板孔的底部垂直，不要倾斜。这样产生的gap的距离才与枪头末端的外直径相等。Gap的距离可以选用不同型号的枪头调节。划痕在同一方向成一条直线。
4.在垂直与第一条划痕的方向制作另一条划痕，每孔划痕成十字交叉型。
5.划痕后，用培养基轻轻的清洗板孔2次，以去除脱落细胞。
6.每孔添加新鲜培养基。
7.（培养基中含有某些成分，如抑制/促进细胞迁移和/或增殖的化学物质）
8.细胞生长48小时（或根据时间需要）。
9. 1xPBS清洗细胞两次，然后使用3.7%多聚甲醛固定30分钟。
10. 1%的结晶紫（2%乙醇溶解）染色30分钟。
注意事项
为了降低实验结果的可变性，建议每孔选择多个视野观察，每组做多个重复。常见问题
gap的距离可通过Photoshop或ImagJ软件测量，为了降低实验结果的可变性，建议每孔选择多个视野观察，每组做多个重复。
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