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叶绿体被膜完整性的测定
发布时间： 2023-01-16 点击次数： 778次原理
由于玻璃氰-化-钾不能透过被膜，故完整叶绿体在等渗介质中不能进行玻璃氰-化-钾光还原的Hill反应。而失去完整被膜的叶绿体，铁氰-化-钾可以进入类囊体进行Hill反应。根据这一原理，比较胀破与未胀破的叶绿体Hill反应速率，就可计算叶绿体被膜的完整度。材料与仪器
植物材料
铁氰-化-钾 NH4Cl
氧电极测氧全套装置 烧杯 微量进样器 洗耳球步骤
1. 取0.1ml叶绿体提取液加到0.9ml的蒸馏水中并搅拌1min，使叶绿体被膜胀破，加1ml测定介质Ⅰ悬浮备用。
2. 取0.1ml未胀破叶绿体提取液加入反应杯中，视反应杯体积加入测定介质Ⅱ，加入适量铁氰-化-钾和NH4Cl，使铁氰-化-钾和NH4Cl的最终浓度都为1mmol/L。搅拌，平衡1min，照光测定Hill反应放氧速率，记录5min，然后清洗反应杯。
3. 将已胀破叶绿体加入反应杯中，再加入适量测定介质Ⅱ、铁氰-化-钾和NH4Cl，使反应体系物质最终浓度同未胀破叶绿体测定体系，测定过程同2。
4. 分别计算胀破和未胀破的叶绿体测定体系中单位时间的放氧量（或Hill反应速率）。
5. 计算被膜完整度。
注意事项
1. 本实验所用玻璃要存放在冰箱中，存放时间不宜过长，最好现配现用。
2. 叶绿体的分离要在0~4℃下进行，玻璃器皿和溶液都须预冷，操作要快，整个分离过程最好在5min内完成。
3. 离心过程中离心机的转速不宜过高，否则叶绿体中的淀粉粒会打破叶绿体被膜。
4. 被膜完整度的测定过程中，反应杯内破碎叶绿体与完整叶绿体的叶绿素含量应相等。
常见问题
叶绿体的外膜和内膜合称为被膜。叶绿体的外膜和内膜都是连续的单位膜, 每层膜的厚度为6～8nm, 内外两膜间有10～20nm宽的间隙, 称为膜间隙。与线粒体不同的是，叶绿体的内膜并不向内折成嵴, 但在某些植物中，内膜可皱折形成相互连接的泡状或管状结构，称为周质网(peripheral reticulum)，这种结构的形成可增加内膜的表面积。以上就是本期的内容，更多资讯，欢迎点击安培生物网站链接了解更多技术与产品资讯。
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