H1人胚胎干细胞培养常见问题

疑难解答

•是否还需要往H1细胞专用培养基中补充或添加成分？

不需要。H1细胞培养基中各个成分的质量和浓度都经过了优化实验，支持人ESC/iPSC的长期培养，无需再自行添加。

•培养基中有沉淀状物质是否是质量问题？

添加剂在解冻过程中，若有少量沉淀析出，属于正常现象，不影响使用，请充分混匀后与基础培养基混合。但添加剂不能在37℃解冻，否则会析出大量沉淀，影响培养基的效价。如果培养基中出现大量沉淀，请不要使用。

•是否能在37 ℃反复水浴H1细胞专用培养基？

不能。频繁地在4℃和37℃之间转换会导致H1细胞专用培养基中含有的因子失活，H1细胞专用培养基在使用前平衡至室温即可。

• H1细胞在传代后不贴壁怎么解决？

造成H1传代后不贴壁的最可能的原因：

① 细胞消化时间不合适；②消化后吹打次数不合适，使得完成传代后细胞集落过大或过小。

• H1分化怎么处理？

① 细胞在刚复苏或传代时，小的细胞团不呈现标准的克隆形态，培养几天或传代后可恢复。②如果H1分化的表现为干细胞克隆形态良好，克隆周边出现散在的分化细胞，可通过高比例传代（≥1:10），使得分化细胞的密度减少，低密度的分化细胞可被H1培养体系筛选去除，如未全去除，可用细胞刮或巴斯德管刮除。

② 如果H1分化的表现为克隆内部松散，边缘不平滑，在分化比例小或分化不严重的情况下，可通过连续传代2 ~ 3次恢复，如果分化严重，建议弃除。

• 细胞复苏率低是什么原因？

细胞复苏需使用H1细胞复苏培养基，可大大提高细胞的复苏效率。复苏过程中，转移细胞、吹打混匀和重悬细胞时，吹打力度要轻柔，并尽量减少吹打次数，细胞接种后，即刻在显微镜下观察细胞团块的大小，4 ~ 10个细胞的团块为最佳。如果吹打力度过大或次数过多，导致细胞分散成单细胞，细胞复苏率将偏低。

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