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兔多克隆抗血清的制备
发布时间： 2023-04-12 点击次数： 949次材料与仪器
抗原
PBS 乙醇
注射针头 注射器 培养箱步骤
1. 取2 ml 的弗氏完-全佐剂加到2 ml 的溶于PBS的纯化抗原中，使之乳化。用3 ml 注射器抽取此乳化液，接上22G注射针头，排出注射器中的气泡。2. 将兔子敢在固定架上，用一只手抓住兔的颈背部毛皮，另一只手托住兔的后腿及臀部，将兔束紧固定以使后肢不能伸张，用70%乙醇对所要注射的区域进行清洁消毒，在后肢大腿肌肉内进针约1 cm 深，毎条大腿肌肉内最多注射0.5 ml 乳化液。3. 四周后，用1 mg 的混溶干弗氏不完-全佐剂的抗原乳化液（1：1）对兔进行肌肉内加强免疫注射，操作步骤同1和2，初次加强免疫后2周再次进行加強免疫注射。
4. 第二次加强免疫注射10天后，从兔的耳缘静脉处放血。
（1）先将兔固定在固定架上（固定紧），使其耳朵伸出，用70%乙醇洗洁消毒一侧耳朵。
（2）将兔耳置于热灯之下，用手指轻轻地拍打兔耳；1~2 min 内兔耳上的血管即会充分地充盈。
（3）用一消毒过的解剖刀 的锋尖在兔耳缘静脉上迅速划一长约0.5 cm 的小口，收集兔血于50 ml 的塑料离心管中，直至伤口不再流血为止。
（4）使兔血顺管壁下落，以避免发生溶血。5. 将兔耳擦拭干净，涂以70%乙醇，在耳朵伤口上涂一层凡士林，以减轻由乙醇产生的皮肤刺激感。6. 将兔血在室温下静置数小时后置4 ℃过夜，用一木质的拨棒将血凝块轻轻地挑松并使之由离心管的侧壁脱落，将血洧移到合适的离心管中，5 000 g 离心10 min，去除残留的红细胞及其他碎片。7. 每两星期进行进一步的加强免疫。每次加强免疫后10天，可采集一次兔血，兔的两只耳朵可轮流交替进行采血。8. 采用ELISA法或RIA法对血清中的特异性抗体进行滴度测定。如果需要的话。
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