细胞爬片免疫组化染色实验步骤

原理：

免疫组织化学技术：检测组织原位表达的肽类、激素、神经递质、细胞因子、受体、表面抗原等抗原性物质。

（一）组织和细胞标本的准备

1. 组织标本的取材-取材新鲜，固定及时，形态完好。

   
   

2. 细胞标本的准备

（1）活体细胞标本：印片法、穿刺吸取法、沉淀法

（2）培养细胞标本：

① 细胞涂片: 将细胞制成悬液（10^6）涂在 涂有切片粘合剂的载玻片上，晾干后固定（细胞甩片）。

②细胞爬片: 将细胞直接培养在盖玻片上 将细胞直接培养在6孔或9孔板上。

3.固定

(1)保持形态：终止和抑制外源性和内源性酶活性，防止 组织细胞的死后变化，防止自溶和腐败，保持组织细胞的固有形态。

(2)保存抗原：使细胞内的蛋白质、脂肪、糖和酶等各种抗原成份转变成不溶性物质，以保持它原有的结构和定位与生活时相仿。

（3）硬化作用：固定剂兼有硬化作用、使组织硬化、增加组织硬度、便于制片。

（4）便于观察：使组织中的各种物质沉淀和凝固起来而产生不同的折射率，造成光学差异，以便染色后易于鉴别和观察;经过固定的组织能对染料产生不同的亲和力而着色清晰，便于辨认。

注意事项：

①防止脱片：玻片预处理(多聚赖氨酸)、温和操作。

②力求保持组织新鲜， 勿使其干燥， 尽快固定处理。

③组织块不易过大过厚，必须小于 2cm x 1.5cm x 0.3cm，尤其是组织块厚度须保持在0.3cm 以内。

④固定剂必须有足够的量，在体积上一般大于组织20倍。

⑤组织固定后， 应充分水洗，去除固定剂，以减少固定剂造成的人为假像。

（三）细胞爬片的免疫组化染色

1. 取出细胞爬片，迅速置入冷丙酮固定 20 ∼30 分钟。

2. 蒸馏水浸泡 5 分钟，2 次。

3. 打孔液浸泡 5 分钟。

4. 蒸馏水浸泡 5 分钟，2 次。

5. 后接前述实验步骤的第 6 步（正常血清封闭）。

注：第 3、4 步仅用于检测细胞内抗原，检测细胞膜抗原时不用。

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