Caco2细胞培养经验分享

背景介绍

Caco2细胞是常见的结肠腺癌细胞，正常情况下，Caco2细胞在培养的过程中贴壁生长，其形态多为多边形或梭形，增殖速度较快，其镜下形态如下图所示，密度已大于90%，可以进行传代。

图：Caco2细胞形态

培养方法

1.培养基配置：DMEM高糖培养基+10%胎牛血清+1%青霉素链霉素双抗+1%谷氨酰氨。

2.其余需要准备的试剂耗材包括：无菌PBS、胰酶、无菌枪头、细胞培养皿、15ml离心管、离心机、生物安全柜、水浴锅、75%酒精。

3.培养条件：37℃、5%CO2的细胞培养箱。

4.细胞复苏：提前将水浴锅温度调至37℃，从液氮罐中拿出细胞，迅速放在37℃水浴锅中轻轻晃动，使细胞快速融化，融化后用移液器轻轻混匀，将其转移到15ml离心管内，加入1-2ml培养基，室温800rpm离心5min，去上清后加入1ml培养基重悬10次左右，将其全部加入6cm细胞培养皿内（提前加入4-6ml培养基），十字混匀后放入细胞培养箱中，24h观察细胞密度进行后续操作。

5.细胞传代：当细胞密度≥90%时，进行细胞传代，吸掉原有培养基，沿培养皿边缘加入1ml PBS清洗，吸掉PBS后加入750μl含EDTA的胰酶消化，消化时间2min左右，消化完成后加入1.5ml培养基中止消化，用移液枪吹打，保证细胞全部被吹下，将混合液全部转移到离心管中，室温800rpm离心5min，去上清后加入1ml培养基充分重悬，取333μl加入有4ml培养基的6cm细胞培养皿中，十字混匀后放入细胞培养箱内，1-3天后根据细胞密度换液或传代。

6.细胞冻存：如前述收集细胞沉淀，加入1ml冻存液（培养基：FBS：DMSO=7：2：1）充分重悬，将混合液移入冻存管内，标记好基本信息，将冻存管入冻存盒后放入-80℃冰箱，24h后可将冻存管放入-80℃冰箱细胞盒内。

一些心得

1.细胞新复苏后，一般24h进行补液2ml，48h后再进行传代处理。对于新复苏的细胞由于比较脆弱，一般第一次传代比例为1：2。

2.Caco2细胞增殖较快，上述提到的333μl是按常规1：3的比例进行传代，最大比例应不超过1：7。就我个人来说，1：3传代2天即可长满，仅作为参考。

3.对于新复苏的细胞，若要冻存，最少应该传一代再进行冻存。同样如果要进行细胞转染等对细胞有较大伤害的操作时，最少应该传两代，保证细胞质量良好的情况下进行。

4.细胞培养全程应注意无菌操作，用到的试剂耗材均使用75%酒精消毒，同时也要对手部进行消毒。

安培生物致力成为推动生命科学进步值得信赖的合作者

深圳/湛江安培生物科技有限公司,是一家具有核心的技术实力、先进的经营管理水平和完善的市场销售体系的生物高科技企业。总部设在广东，服务面向全国。安培生物集进口试剂、实验室耗材销售、技术服务与合约开发为一体的专业化高科技公司，旨在为生命科学的发展提供较好的产品与服务。本公司建立了涵盖分子生物学、细胞生物学、免疫学、信号传导和神经科学等领域的产品供应线，在各个领域内向用户提供较高的水平和质量稳定的产品，安培生物致力于为广大的科研机构、高等院校等客户提供各种产品、技术支持与服务。

 可以在第一时间为用户提供比较先进的专业资讯和完备的产品和物流服务。 专业的技术力量使得我们能够为广大用户提供强大的技术支持，深厚的人脉资源使得我们在全国主要城市拥有众多的合作伙伴，安培生物非常荣幸能将世界上先进的高科技产品推荐给国内从事生物学领域科研的老师和同仁。作为专业性的产品供应商，公司出资存备了大量现货，配合优秀的销售队伍以及专业的技术支持，随时为客户提供服务。