原代细胞培养入门

大家好！这篇文章是关于原代培养的入门知识，向刚入门的同学科普这个实验的基础。

包括以下内容：

1. 原代培养的概念和流程

2. 分离组织的操作和注意事项

3. 解离组织获取细胞的三种常见方法

原代培养是指细胞分离之后至第一次传代之前的细胞培养阶段，之后细胞就转变成细胞系。

原代培养可分为4个步骤：

1. 获取样品
   

2. 分离组织

3. 解剖或解离组织

4. 接种于培养皿中培养

用于原代培养的样品中可来源于2类，一是实验室样本，包括实验动物的器官、组织，例如胚胎、肠道等；二是临床样本，例如通过手术过程分离出来的病人组织。

分离组织

1. 在取材时可以尽量多去除脂肪和坏死的组织。
2. 使用锋利的手术刀将组织切碎，以减小对组织的损伤

获取细胞

获取组织之后，我们要把细胞从组织中分离出来继续生长，这个操作可分为两种:

1.将组织块贴附于适宜的基质中，细胞可从组织块向外迁移生长，这个操作过程叫原代外植;

2.将组织块用机械法或酶消化法处理获得细胞悬液，接种细胞悬液，其中部分细胞最终将黏附于基质开始生长。

如果所取组织很小，则适于用原代外植法；如果组织较大，可用酶消化法以获得更多的细胞。

软的组织适合于用机械法解离，一些硬的组织，如果产物的多少并不重要，或者从纤维间质组

织分离松散黏附的细胞，也可用机械法分离。

胰蛋白酶处理

酶处理方法主要分为胰蛋白酶和胶原酶处理，而胰蛋白酶的反应条件来划分又可以分为冷胰蛋白酶和温胰蛋白酶两种。

• 切碎或“溢出"，切割作用或被切表面的破损使细胞释放出来
• 筛网挤压，用注射器芯将组织挤压过筛网
• 注射器吸打，将组织吸入注射器中，通过-个大孔径的针头或导管将液体快速打出
• 用吸管打碎，用大孔径的吸管吸取组织块上下吹打

2 不同种类的细胞应采用相应的解离方法，例如，胰蛋白酶比胶原酶作用强，建立单细胞悬液更高效；胶原酶不能解离上皮细胞，但这一特性成为它的一个优点，可利用它使上皮细胞与间质细胞分离并保持上皮细胞团的活力。机械法比酶消化法快，但对细胞损伤大。

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