细胞计数的实验步骤＆问题分析

细胞计数在细胞实验中是非常常见的，大多数实验室目前使用细胞计数板进行细胞计数，细胞计数板的结构如下图所示：

实验步骤

1.所用细胞密度达到一定要求后进行细胞计数铺板，提前准备好细胞计数板、盖玻片、计数器；

2.弃掉原有培养基，加入1ml温浴的PBS缓冲液清洗；

3.弃掉PBS缓冲液，加入胰酶消化细胞，消化时间根据细胞类型及日常经验决定；

4.消化相应时间后，加入二倍体积的培养基终止消化，用移液器将细胞全部吹下，转移至离心管内；

5.离心机室温800rpm,离心5min；

6.准备和所计数细胞种类相同的1.5ml Ep管，各加入PBS缓冲液980ul备用；

7.准备细胞计数板，并在计数区盖上盖玻片；

8.将5中离心结束的细胞弃上清，加入1ml培养基，充分混悬后取20ul加入到6中的Ep管中，充分颠倒混匀后取12ul加入牛鲍计数板一侧的计数区内，保证计数区充盈。

9.低倍显微镜（物镜4）下找到计数视野，上图中“"B C D E“"区为细胞计数区。

10.高倍镜（物镜10）下计数细胞，依次计数4个方格内的细胞数量。

11.计算细胞数量，假设4个方格内细胞总数为A,则每ml的细胞数量为：A/4×104×50（稀释倍数）=B个。

12.假设铺板所需细胞密度为1×104个/ml，则所需8中的细胞混悬液的量为：1×104×C（培养基所需毫升数，如6孔板每孔加培养基2ml）/B=D ml，最后换算成μl即可。

13.铺板：取C ml培养基，加入8中细胞混悬液D μl，充分混匀后依次加入培养皿中，放入细胞培养箱内即可。

4.细胞混悬液加入细胞计数板时，建议使用10μl小枪头、2-20μl移液器，枪头倾斜抵住盖玻片边缘，缓慢加入，务必保证细胞混悬液全部加入，计数区充盈。

关于细胞计数，以如下实例来充分理解上述计算过程：

4.铺板：培养基5孔（为防止不够所以多准备1孔）2ml×5孔=10ml加入细胞混悬液800μl，混匀加入六孔板即可。

以上就是本期的内容，更多资讯，欢迎点击安培生物网站链接了解更多技术与产品资讯。

安培生物致力成为推动生命科学进步值得信赖的合作者

深圳/湛江安培生物科技有限公司,是一家具有核心的技术实力、先进的经营管理水平和完善的市场销售体系的生物高科技企业。总部设在广东，服务面向全国。安培生物集进口试剂、实验室耗材销售、技术服务与合约开发为一体的专业化高科技公司，旨在为生命科学的发展提供较好的产品与服务。本公司建立了涵盖分子生物学、细胞生物学、免疫学、信号传导和神经科学等领域的产品供应线，在各个领域内向用户提供较高的水平和质量稳定的产品，安培生物致力于为广大的科研机构、高等院校等客户提供各种产品、技术支持与服务。

可以在第一时间为用户提供比较先进的专业资讯和完备的产品和物流服务。 专业的技术力量使得我们能够为广大用户提供强大的技术支持，深厚的人脉资源使得我们在全国主要城市拥有众多的合作伙伴，安培生物非常荣幸能将世界上先进的高科技产品推荐给国内从事生物学领域科研的老师和同仁。作为专业性的产品供应商，公司出资存备了大量现货，配合优秀的销售队伍以及专业的技术支持，随时为客户提供服务。