Caco2 细胞培养经验分享

背景介绍

Caco2细胞是常见的结肠腺癌细胞，正常情况下，Caco2细胞在培养的过程中贴壁生长，其形状多为多边形或梭形，增殖速度较快，其镜下形态如下图所示，密度已大于90%。可以进行传代。

培养方法：

1.培养基配置：DMEM高糖培养基 + 10%胎牛血清 + 1%青霉素链霉素双抗 + 1%谷氨酰胺。

2.其余需要准备的试剂耗材包括：无菌PBS、腺酶、无菌枪头、细胞培养皿、15ml离心管、离心机、生物安全柜、水浴锅、75%酒精。

3.培养条件：37°C、5%CO2的细胞培养箱；

4.细胞复苏：提前将水浴锅温度调至37°C，从液氮罐中拿出细胞，迅速放在37°C水浴锅中轻轻晃动，使细胞快速融化，融化后用移液器轻轻混匀，将其转移到15ml离心管内，加入1-2ml培养基，室温800rpm离心5min，去上清后加入1ml培养基重悬10次左右，将其全部加入6cm细胞培养皿内（提前加入4-6ml培养基），十字混匀后放入细胞培养箱中，24h观察细胞密度进行后续操作。

5.细胞传代：当细胞密度≥90%时，进行细胞传代，吸掉原有培养基，沿培养皿边缘加入1ml PBS清洗，吸掉PBS后加入750μl含EDTA的胰酶消化，消化时间2min左右，消化完成后加入1.5ml培养基中止消化，用移液枪吹打，保证细胞全部被吹下，将混合液全部转移到离心管中，室温800rpm离心5min，去上清后加入1ml培养基充分重悬，取333μl加入有4ml培养基的6cm细胞培养皿中，十字混匀后放入细胞培养箱内，1-3天后根据细胞密度换液或传代。

6.细胞冻存：前述收集细胞沉淀，加入1ml冻存液（培养基：FBS：DMSO=7：2：1）充分重悬，将混合液移入冻存管内，标记好基本信息，将冻存管入冻存盒后放入-80℃冰箱，24h后可将冻存管放入-80℃冰箱细胞盒内。

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