无菌操作的注意事项（1）

细胞培养需要无菌技术。

什么是无菌技术？它和普通的实验操作有什么区别？

首先，无菌技术是通过制定一个严格的操作规范来约束每个人做实验的行为规范，从而排除潜在的污染可能。其原则就是在外部环境的微生物和细胞之间建立起一道屏障。

这道屏障有两层含义：

1.让细胞从物理上和外部非无菌的物品隔绝，不让它们直接接触

2.设计实验操作时，所有步骤不能让细胞和外部非无菌环境建立直接联系

说白了，就是从各个环节、细节上去尽力做到没有过失。

实验操作台面

在生物安全柜内进行细胞培养操作，操作台面的使用有以下注意事项：

1 用之前，无论上一个使用者是否有擦拭台面，你都需要重新擦拭一次，并使用70%乙醇消毒台面，再使用紫外照射消毒30分钟以上；

2 操作台面内只放和本次实验操作有关系的实验工具，放置时按照分类和使用习惯来合理放置，切勿堆放在一起，也不要太靠近外部边缘。

3.实验过程中，如果培养瓶、培养皿、多孔板已打开盖子，那么手部和任何其他物品都不应该越过敞口上方，否则将可能把微生物带入器皿内；

4.所有的实验操作，都应该在你的视野范围内进行，也就是你在操作时，必须能看到实验工具的整体，这是为了避免因盲区导致的实验工具的末端触碰到其他物品、台面或你的身体部位，导致污染；

5.在实验过程中，如果出现试剂、培养物液体滴在台面，应停止当前操作，并立即用70%乙醇擦拭台面；

6.实验结束后，所有实验物品都应搬离台面，并再次擦拭清洁，最后用70%乙醇消毒；

个人卫生

1 穿实验服、佩戴口罩和外科灭菌手套，长头发的同学应把头发扎在脑后，佩戴的手套的上缘应该与实验服的袖口重叠在一起，就是把袖口末端塞进手套内；

2 手套在整个实验过程中，不管是否有移出生物安全柜以外的范围，都应间隔一段时间就使用70%乙醇擦拭一次；

3 如果感染了疾病，例如感冒，则应该暂缓实验或佩戴面罩后再进入细胞间做实验；

4 实验过程中，如果实验操作者和培养物之间有玻璃间隔，可以说话，但应该尽量少说话。

试剂和培养基

1 从外部采购的试剂和培养基，如果有外包装，包括纸盒、薄膜等，都应该在细胞间外去除后，再使用70%乙醇消毒外表面后才放入操作台面；

2 如果实验过程中，这些试剂、培养基曾拿出过生物安全柜以外的范围，例如放入了冰箱、培养箱、水槽等，需要重新擦拭干净后用70%乙醇消毒，然后才可以再次放入操作台面内。

培养物

1. 在每一次实验之前，先用肉眼观察细胞是否正常没有污染，并在显微镜下再次检查确认，如果污染则应停止该次实验并清理掉细胞；细胞拿进生物安全柜之前，同样需要用70%乙醇擦拭培养器皿外表面；

2 每一批次的细胞，在培养周期内，都应该取一部分出来单独使用无抗生素的（血清）细胞培养基进行培养检测，判断其是否有潜在污染，这是为了排除抗生素对污染的干扰。

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