无菌操作的注意事项（2）

我们这篇文章主要讲述几个常见实验操作的注意事项。包括：擦拭、加盖、灼烧、移液；

01 擦拭

实验过程中需要擦拭的对象有工作台面、手套、瓶皿/孔板表面、耗材/器械表面。

对于工作台面，在实验开始前，结束后都需要试用70%乙醇擦拭，如果实验过程中出现液体滴落在台面，也需要擦拭台面后才能继续实验；

对于手套，除了佩戴一次性灭菌处理过的手套外，整个实验过程都应间隔一段时间就擦拭手套一次；

对于瓶皿/孔板，如果实验过程中被拿出过生物安全柜范围以外，那么再次放回生物安全柜或培养箱之前，都应该用70%乙醇进行外表面擦拭；

对于耗材/器械表面，如果是一次性耗材，触碰了实验台面、或其他实验耗材/器械/手套等的外表面，都应该扔弃不再试用；如果是非一次性的器械，出现上述误触，则应该立即用70%乙醇擦拭整个可能被污染的区域。

02 加盖

对于需要反复使用的含盖的器皿，当实验结束后，清洗瓶盖时，应该注意清洁瓶盖内侧，包括含橡胶垫的部分。

有条件的实验室，可以在器皿盖上盖子后，使用70%乙醇擦拭外表面，然后再通过外层包裹锡箔纸的方式，来尽可能降低外部环境灰尘沉积在盖子和器皿之间缝隙的现象。

03 灼烧

灼烧是一种可以去除颗粒性灰尘或棉绒的有效办法，火焰也会造成附近的气流上升，避免灰尘沉降。

但是，在生物安全柜内，点燃酒精灯进行灼烧是不合适的。

生物安全柜工作时，会为内部空间提供一个稳定的层流，但酒精灯的火焰会对它产生干扰，进而影响内部的无菌环境，提高了生物污染的风险。

04 移液

移液部分，我们分为小体积移液、大体积移液和溶液倾倒转移来讲解。

对于小体积移液，一般特指小于1mL的液体转移，因为其体积小，通常需要使用移液器来操作。

而小体积的移液吸头比较短，在吸液的过程中有可能出现移液器下端也进入瓶皿内部的情况。

此时就需要特别注意，不能让移液器碰触到瓶皿内壁，如果碰触了，则应该立即使用70%乙醇清洁移液器下端，然后才可以继续往下进行实验操作。

对于大体积移液，例如5/10/25mL或以上的液体转移，可以用大量程的移液吸头或大量程的电动移液器辅助移液。

但不管是什么体积的移液，都应该确保吸头或移液管的末端内是含有棉花或透气胶塞的，这样可以有效避免因为移液过程中，液体吸入移液器内部造成污染。

但由于大体积移液的液体转移速度快、量大，有时候即使有棉花，也会出现液体被吸入移液器内的现象，这时就只能停止实验，或改用其他未被污染的移液器来操作了。

关于溶液倾倒，有时液体的转移不需要特别精准，会把溶液从一个瓶内直接倒入另一个瓶内或管内。

在操作时，需要注意溶液从原来的容器中倒入新的容器时，瓶口应保持悬空，而不是直接接触新容器的瓶口边缘来完成液体转移。

因为后者会容易出现液桥，即液体在两个挨得很近的接触面之间形成的水柱，这样的水柱容易被微生物进入；同时，在倾倒的时候也要注意不要让液体流淌在容器的外表面，因为这样也会提高微生物污染的风险。

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