提取纯化产品册---01 组织保存产品

技术背景

细胞内的核酸包括DNA与RNA两种分子，均与蛋白质结合成核蛋白 (nucleoprotein)。其中真核生物的DNA又有染色体DNA与细胞器DNA之分。前者位于细胞核内，约占95%，为双链线性分子；后者存在于线粒体或叶绿体等细胞器内，约占5%，为双链环状分子。除此之外，在原核生物中还有双链环状的质粒DNA；在非细胞型的病毒颗粒内，DNA 的存在形式多种多样，有双链环状，单链环状，双链线状和单链线状之分。RNA是以DNA的一条链为模板，通过碱基互补配对原则，转录而形成的一条单链，主要功能是实现遗传信息在蛋白质上的表达，是遗传信息向表型转化过程中的桥梁。在此过程中，tRNA携带与三联体密码子对应的氨基酸残基，与正在进行翻译的mRNA结合，而后rRNA将各个氨基酸残基通过肽键连接成肽链进而构成蛋白质分子。相对来讲，RNA分子比DNA分子要小很多，其种类，大小结构和功能均更加多样化。

提取纯化产品册

大多数的分子生物学实验都是从核酸的分离纯化开始，进而展开下游的实验，如 RT-PCR、qPCR 及酶促反应等等。核酸的纯度、产量、质量都会直接影响下游实验。因此，有效地去除各种杂质残留和污染，并保证核酸的完整性，是完成下游实验最基本的条件，这也说明了核酸的分离纯化在分子生物学中的重要地位。核酸分离与纯化的方法很多，应根据具体生物材料的性质与起始量，以及分离核酸的性质与用途而采取不同的方案。

目前，常见的核酸抽提纯化方法主要三类：

溶液型的抽提方法：（酚CHCL3抽提、盐析等）

柱式抽提方法：（离子交换、硅胶柱等）

磁珠纯化方法

选购指南

RNA Keeper Tissue Stabilizer

用于保护新鲜组织RNA完整性的保存剂(R501)    

产品概述    

RNA Keeper Tissue Stabilizer是一种无毒的溶液，可迅速渗入组织内部，灭活内源RNase，立即稳定并保护RNA的完整性。新鲜的组织样本无需液氮速冻，只要浸入RNA Keeper Tissue Stabilizer中，即可在37°C保存1天，室温保存1周，4°C保存4周或在-20°C/-80°C长期保存，且反复冻融不会显著影响RNA的完整性。RNA Keeper Tissue Stabilizer中存放的样本可直接使用 RNA isolater总RNA提取试剂(Vazyme #R401)、(Vazyme #R701)或离心柱法 (Vazyme #RC101)提取RNA。RNA Keeper Tissue Stabilizer可用于脑、心脏、肝脏、胰脏、肾脏、脾脏、肌肉等软性组织的保存，不适用于表面有蜡质或硬壳类的生物体样本保存。

性能展示

将小鼠肝脏组织(1)和脾脏组织(2)保存在RNA Keeper中，分别在37℃放置1天，室温放置1周，4℃放置4周后，用RNA isolater (Vazyme #R401)提取总RNA。电泳结果表明，28S、18S、5S条带均清晰可见，说明RNA具有很好的RNA Keeper Tissue Stasilizer可有效保证样本中RNA不被降解且样本可在RNA Keeper Tissue Stasilizer中稳定储存。
                               

操作流程概要

适用范围

动物组织 / 细胞

组分

操作流程
1.样品处理

①动物组织：把动物组织切成0.5 cm左右见方的组织块，加入5倍体积的RNA Keeper。

②培养细胞：按照标准实验操作方法收集细胞，用PBS 清洗后加入5-10倍体积的RNAKeeper。

③酵母：收集大约10⁸个细胞(12,000 g，2 min)，弃上清。加入 0.5~1 ml的RNAKeeper。长期保存时应将酵母细胞置于RNA Keeper中，室温或4℃放置1小时，

然后离心收集细胞(12,000 g，5 min)，弃上清，再置于-80℃保存。

△只适用于较柔软的植物组织，如嫩叶、嫩茎等；如果植物组织表面有蜡，则RNA Keeper不能充分渗入，严重影响RNA保护效果

2.样品保存

样品存储于RNA Keeper中，一般可在4℃稳定保存4周。若要在-20℃/-80℃长期保存，需要将样品浸入RNA Keeper后，4℃放置过夜，使溶液充分渗入到组织中后，再转移至-20℃/-80℃。

3.RNA提取

去除RNA Keeper：组织块可以直接用灭菌镊子从RNA Keeper中取出，挤掉多余的RNA Keeper，并用吸水纸轻轻吸掉表面液体，立即置于裂解液中匀浆。细胞应先离心(>10,000 g，5 min)，收集细胞沉淀（由于RNA Keeper 密度较大，此时需要使用大于普通介质的离心力）。并用PBS洗涤一次。RNA提取：使用各种常见的RNA抽提试剂盒提取 RNA。

RNA Keeper Tissue Stabilizer

用于保护新鲜组织RNA完整性的保存剂(R502）

RNA Keeper-ICE是一种新型试剂，能使冰冻组织解冻并转变到易于匀浆方法处理的状态，从而提取高质量的RNA。当浸没在RNA Keeper-ICE中的组织从坚硬的冰冻状态变柔软的过程中，该溶液可渗入组织，使RNase失活。组织一旦经RNA Keeper-ICE溶液处理，就能在室温下操作而不用担心RNA降解。样品可在常温下称重，切割，或者进行多种实验而不影响RNA质量。

性能展示

小鼠肝脏冰冻组织经过RNA Keeper-ICE解冻后研磨，提取的RNA进行琼脂糖凝胶电泳。电泳结果表明，28S，18S，5S均清晰可见，说明RNA具有良好的完整性。RNA Keeper-ICE可有效保证RNA完整度的同时对冰冻组织进行解冻。

操作流程概要

适用范围

动物组织 / 细胞

组分

操作流程

1.试剂预处理

将RNA Keeper-ICE于-70℃或-80℃预冷。

2.冰冻样品处理

①动物组织：按100mg组织比不小于1 ml RNA Keeper-ICE的比例，将冰冻组织浸没于预冷的RNA Keeper-ICE中。

△组织块的厚度应不超过0.5cm, 否则会影响RNA Keeper-ICE的渗透效率，导致RNA稳定效果变差。

②培养细胞、白细胞：按照标准实验操作方法收集细胞，用PBS清洗后加入至少10倍体积RNA Keeper-ICE，盖紧管盖，上下颠倒数次。此时沉淀是否被全部悬浮对实验无影响。

-20℃存放至少16h后，组织即可进行匀浆；若不立即匀浆，组织可继续于-20℃稳定存放6个月。

-20℃存放过程中，组织可从RNA Keeper-ICE中取出进行室温切割、称重等操作，之后继续浸润于RNA Keeper-ICE中-20℃保存。

△组织在室温暴露时间不可超过30 min。

3. RNA 提取

将组织取出，用灭菌镊轻轻挤掉多余的 RNA Keeper-ICE溶液，并用吸水纸轻轻吸掉表面液体，置于裂解液中立刻匀浆。

△如果是细胞样品，10,000g，4℃ 离心 1 min，弃上清，加入裂解液。

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