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    提取纯化产品册---02 组织保存产品

    发布时间: 2025-01-13  点击次数: 47次

    RNA-easyTM Isolation Reagent(保存条件:2-8℃储存 , 于 2-8℃运输)

    常温RNA提取试剂(R701)

    操作简便 单相提取,无需多相分层,并且全程可在室温进行操作

    兼容性广 广泛适用于各类动植物和微生物样品,轻松应对各类培养细胞

    RNA 质量高 RNA 纯度高,完整度好,产量媲美传统 Trizol 法提取

    安全低毒 无需使用CHCL3、β- 巯基乙醇等有毒有害试剂


    产品概念

    RNA-easyTM Isolation Reagent广泛适用于从各类动物组织、植物材料、培养细胞和微生物等样品中提取Total RNA和Small RNA。与传统Trizol提取方法相比,本产品使用方法简单,不需要使用CHCL3进行分层,且全程可在常温进行;此外,本产品在高效地抑制RNA酶(RNase)活性的同时,将蛋白质、DNA、多糖等杂质沉淀到管底,从而实现单相提取,并有力保证了RNA的完整度和纯度。使用本产品在50 min内即可完成全部的提取过程,提取的RNA可以直接用于cDNA克隆、qRT-PCR检测、mRNA纯化、体外翻译、Northern blotting杂交、高通量测序等各种分子生物学实验。


    性能展示

    样本兼容性广

    分别使用 Vazyme #R701 与市售 Trizol 产品 ( 来自 TTaTi 公司 ),按照各自说明书对小鼠肝脏 (25 mg)、玉米叶 (20 mg) HEK293细胞 (2 × 106 ) 进行总 RNA 提取,并对最终获得的 RNA 产物(1 μg) 进行琼脂糖凝胶电泳检测,可以看出,Vazyme #R701 能很好地兼容不同样本总 RNA 的提取。

    RNA 产量高

    分别使用Vazyme #R701 与市售Trizol产品(分别来自 T、Ta、Ti公司),按照各自说明书对小鼠肝脏(25 mg)、玉米叶(20 mg)和HEK293细胞 (2×106个)进行总RNA提取。以T公司产量为基准,可以看出,Vazyme #R701 提取不同样本的总RNA与市售其他产品相比,产量更高,且对细胞样本的提取表现最佳。

    RNA 质量高

    分别使用 Vazyme #R701 与市售 Trizol 产品,按照各自说明书对 HEK293 细胞 (2 × 106 ) 进行总 RNA 提取,并对最终获得的 RNA 产物使用 Onedrop 测定 OD260/280 比值 , 以及 Agilent 2100 Bioanalyzer 进行 RNA 完整度分析。从图中可以看出,Vazyme #R701 提取的 RNA 完整度好,纯度与 T 公司和 Ta 公司处于相同水平,超过 Ti 公司 (P =0.0077)

    操作流程概要

    适用范围
    动物组织(肝脏、心脏、肌肉、脑组织、肾脏、斑马鱼胚胎等)、植物组织(水稻、玉米、拟南芥、小麦、大豆、土豆、烟草等)、
    细胞(HEK293、Hela、杂交瘤、CHOK1、黑色素瘤 B16F10、HepG2、心肌细胞 H9C2、MEF 等)、细菌(大肠杆菌等)、真菌(酵母、曲霉等)

    组分

    提取纯化产品册---02 组织保存产品

    自备材料

    异丙醇,75% 乙醇 (RNase-free ddH2O 配制 ),RNase-free ddH2O

    样本制备及提取流程

    样本制备

    动物/植物组织

    液氮研磨:

    将新鲜组织经液氮冻后,迅速转移至液氮预冷的研钵中,用研杵研磨,期间不断加入液氮,直至研磨成粉末状(无明显可见颗粒)。

    将研磨成粉的样品转移至离心管中,大约每25mg组织加入500μl RNA-easy (RNA-easyTM Isolation Reagent),剧烈振荡或移液枪吹打,使样品充分裂解。
    直接裂解:计算细胞数量,全部弃除培养液,每10 cm2 培养面积的细胞加入2-3 ml RNA-easy,用枪吹打使细胞从壁上全部脱落,将裂解液转移至离心管中,
    用移液器反复吹打直至无明显颗粒样存在。
    胰酶消化处理:计算细胞数量,将胰酶消化下来的细胞进行300 g 离心5 min,收集细胞。每10 cm2 培养面积的细胞加入2-3 ml RNA-easy,用枪吹打直至看不
    到细胞团块。
    离心收集细胞,用PBS洗涤一次;每1-5×106个细胞加入500μl RNA-easy;用移液器反复吹打直至无明显颗粒样存在。
    样本制备
    ▲ 研磨会部分影响RNA的得率和质量。
    ▲ 每500ul RNA-easy 试剂最多可以裂解50 mg常规组织,过多的样本量可能会导致裂解不充分,并使产物纯度降低。
    ▲ 部分良好的韧性或含较多外基质的组织,可能会出现不能全部溶解的现象,在步骤2中将进入沉淀中,不会影响后续 RNA 提取及RNA质量。
    ▲ 若没有条件用液氮研磨,可将新鲜组织尽量剪碎浸泡在RNA-easy中,用电动匀浆器高速匀浆至组织块全部裂解;或将新鲜组织充分浸泡在 RNA Keeper Tissue
    Stabilizer (Vazyme #R501) 中,即可有效失活 RNase,再用 RNA-easy 处理并用电动匀浆器匀浆至全部裂解


    培养细胞

    贴壁细胞:
    悬浮细胞:
    将新鲜组织经液氮速冻后,迅速转移至液氮预冷的研钵中,用研杵研磨,期间不断加入液氮,直至研磨成粉末状(无明显可见颗粒)。
    将研磨成粉的样品转移至离心管中,大约每25 mg组织加入500 μl RNA-easy (RNA-easyTM Isolation Reagent),剧烈振荡或移液枪吹打,使样品充分裂解。
    直接裂解:计算细胞数量,弃除培养液,每10 cm2 培养面积的细胞加入2-3 ml RNA-easy,用枪吹打使全部的细胞从壁上脱落,将裂解液转移至离心管中,
    用移液器反复吹打直至无明显颗粒样存在。
    胰酶消化处理:计算细胞数量,将胰酶消化下来的细胞进行300 g 离心5 min,收集细胞。每10 cm2 培养面积的细胞加入2-3 ml RNA-easy,用枪吹打直至看不
    到细胞团块。
    离心收集细胞,用PBS洗涤一次;每1-5 × 106 个细胞加入500 μl RNA-easy;用移液器反复吹打直至无明显颗粒样存在。


    提取流程
    步骤
    1
    向上述裂解液中加入2/5体积的RNase-free ddH2O (每500μl RNA-easy使用200 ul),剧
    烈震荡15sec,室温静置5min。

    步骤 2
    室温,12,000×g离心 15 min。

    步骤 3
    取出离心管,小心吸取上层水相至一个新的离心管中。

    步骤 4
    加入等体积异丙醇,上下颠倒混匀,室温静置10 min。

    步骤 5
    使用12,000Xg室温离心 10 min,通常可以看见白色胶状沉淀,小心弃去上清。

    步骤 6
    加入 500 μl用 RNase-free ddH2O 配制的 75% 乙醇,上下颠倒数次,充分洗涤管盖和管壁,
    并轻弹管底,让沉淀悬浮起来。

    步骤 7
    使用8,000×g室温离心 3 min,弃去上清。

    步骤 8
    重复步骤6和7一遍,弃尽上清 。
      步骤 9
    加入适量的 RNase-free ddH2O 溶解沉淀,室温涡旋 3 min ( 或使用移液器反复吹打 ),有效溶解样品。提取的 RNA 产物可以分装后在 -85 - -65°C长期保存,在 -30 - -15°C仅可短期保存。

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