提取纯化产品册---05 柱式DNA提取产品（DC102、DC103）

FastPure®  Cell/Tissue DNA Isolation Mini Kit

细胞/组织基因组DNA提取试剂盒 (DC102)

简单快速 组织全部消化后，1 h内即可获得超高纯度的基因组DNA

适应性广 适用多种动物组织、培养的细胞、唾液、牛奶等液体样本

纯度高 获得的 DNA 纯度高，可直接用于 PCR、文库构建等分子实验

安全性高 无需添加酚氯仿等有机溶剂 分别选用小鼠肝脏 / 尾尖 / 肺 / 肌肉 / 脾脏 / 肾脏 / 心脏 / 脑进行基因组 DNA 提取，琼脂糖凝 胶电泳进行检测。 M: DL15000 DNA Marker (Vazyme #MD103)

保存条件：本产品除 Proteinase K 和 RNase Solution 外的其他组分于 15℃ ~25℃保存  Proteinase K 干粉和 RNase Solution 可室温运输，收到产品后请保存于 -20℃。溶解后的 Proteinase K 溶液请分装保存于 -20℃

产品概述

本试剂盒基于硅胶柱纯化技术，提取过程中无需使用酚 / 氯仿有机溶剂抽提、醇类沉淀，仅需 30 min-60 min 即可得到高纯度、高产量基因组 DNA，后续可直接用于酶切反应、PCR、qPCR、文库构建及 Southern 杂交等实验。

性能展示

分别选用小鼠肝脏 / 尾尖 / 肺 / 肌肉 / 脾脏 / 肾脏 / 心脏 / 脑进行基因组 DNA 提取，琼脂糖凝 胶电泳进行检测。 M: DL15000 DNA Marker (Vazyme #MD103)

操作流程概要

适用范围

1-20 mg 动物组织 / ＜ 5 × 106 培养细胞 / 液体样本

组分

自备材料

1.5 ml 灭菌离心管，无水乙醇，水浴锅。

△ Washing Buffer A 和 Washing Buffer B 需在使用前添加一定量的无水乙醇

样本制备

动物组织

1.向 1-20 mg 剪碎或研磨的组织 ( 肝脏 、脾脏及肾脏小于 10 mg ) 中加入 230 µl Buffer GA 和 20 µl PK 工作液 ，涡旋混匀。

样品过量会降低 DNA 产量和纯度。肝脏、脾脏及肾脏等样品富含 DNA，取样应小于 10 mg。肌肉和皮肤等样品 DNA 含量低的组织，取样可扩大至 20-50 mg，同时按比例增加 Buffer GA，Buffer GB 和无水乙醇的用量。

2.55°C水浴至组织全部酶解。

▲ 消化期间可颠倒混匀数次以促进酶解过程。组织块尽量剪碎以缩短消化时间。消化时间取决于样品的类型和匀浆效果。一般组织样品需 0.5-3 h，鼠尾需 6-8 h 或消化过夜。

▲ 若消化液比较浑浊或存在明显的颗粒，12,000 x g 离心 3 min，转移上清液至新的 1.5 ml 离心管中。
3.（可选）若RNA残留对后续实验影响较大，加入10ulRNase Solution至消化液中，颠倒混匀，室温或37°C放置15-60min。
▲ RNA 消化时间取决于样品类型。肝脏和肾脏富含 RNA，可延长消化时间至 60 min。
4.加入250 µl Buffer GB至消化液中，最高速度涡旋混匀 20 sec，70℃水浴 10 min。

培养细胞

1.400 x g 离心 5 min 收集细胞，弃上清液。加入 220 µl PBS 、10 µl RNase Solution 和 20 µl PK 工作液至样品中，重悬细胞。室温静置 15 min 以上。

▲ 细胞总量不可超过 5×106 个。

2.加入 250 µl Buffer GB 至细胞重悬液中，涡旋混匀。65℃水浴 15-30 min。

提取流程

FastPure®  Cell/Tissue DNA Isolation Mini Kit

细胞/组织基因组DNA提取试剂盒 (DC103)

得率高，完整性好 提取的基因组DNA产量高，且完整性好

纯度高 获得的 DNA 纯度高，可直接用于下游实验

安全性高 无需添加酚氯仿等有机溶剂

保存条件 :RNase A 及 Proteinase K 干粉于 -30℃ ~ -15℃保存，其他组分常温 (15℃ ~ 25℃ ) 保存

产品概述

本试剂盒主要适用于从各种来源的细菌（革兰氏阴性、革兰氏阳性）培养液中提取基因组 DNA。试剂盒采用硅胶膜纯化技术，提取过程中无需 使用酚氯仿等有毒试剂，也无需进行耗时的醇类沉淀，并最大限度的去除 RNA，杂蛋白、脂类及其他抑制性杂质。提取的基因组 DNA 纯度高， 质量稳定，可用于酶切、PCR、Southern 杂交等下游实验。一般情况下，得到的 DNA 包括有基因组 DNA 和质粒 DNA。

性能展示

产量高、完整性好

使用细菌基因组 DNA 提取试剂盒（Vazyme #DC103）以及市售其他品牌细菌基因组 DNA 提取试剂盒（分别来自 Supplier T、C、O），提取不 同来源的细菌基因组 DNA。 起始量：金黄色葡萄球菌（4.0×108 cells），大肠杆菌 DH5α（4.5×108 cells），大肠杆菌 Fast T1（4.5×108 cells），洗脱体积 70 μl，DNA 上 样量 2 μl。琼脂糖凝胶浓度为 1%。 M：DL 15000 DNA Marker ( Vazyme #MD103 )

纯度高

分别使用 Vazyme #DC103 与 T 公司相关产品提取等起始量大肠杆菌 DH5α 的基因组 DNA，通过 OneDrop 测定基因组 DNA 的浓度与纯度。 可以看出 Vazyme #DC103 的纯度更高。

操作流程概要

适用范围

细菌（革兰氏阴性、革兰氏阳性）

组分

自备材料

Lysozyme（Vazyme #DE103）（革兰氏阳性菌），无水乙醇，1.5 ml 离心管，水浴锅或金属浴。
△ Buffer PB 和 Buffer PW 需在使用前添加一定量的无水乙醇

样本制备

革兰氏阴性菌

1.取细菌培养液 1 - 5 ml（小于 1.0 × 109 个细菌），10,000 rpm (~11,500 × g) 离心 1 min，倒弃培养液。

细菌数量可以通过分光光度计进行测量，1OD600 约为 1.5 × 109 个细菌。

2.加入 230 μl Buffer GA，振荡至菌体全部悬浮。

3. ( 可选 ) 若 RNA 残留对后续实验影响较大，加入 4 μl RNase A 至消化液中，振荡 15 sec，室温放置 5 - 15 min。  

4.加入 20 μl Proteinase K，振荡混匀。  

5.加入 250 μl Buffer GB，振荡混匀，70℃水浴 10 min。    

加入 Buffer GB 可能会产生白色沉淀，一般 70℃放置时会消失，不会影响后续实验。若溶液未变清亮， 说明细胞只有部分裂解，可能会导致提取的 DNA 量少且不纯。

革兰氏阳性菌

1.取细菌培养液 1 - 5 ml（小于 1.0 × 109 个细菌），10,000 rpm (~11,500 × g) 离心 1 min，倒弃培养液。

细菌数量可以通过分光光度计进行测量，1OD600 约为 1.5 × 109 个细菌。

2.加入 180 μl Lysozyme（自备），振荡使菌体重悬，37℃水浴 30 min。

大部分细菌水浴30 min后已充分破壁，但是某些细胞壁较厚的细菌（比如金黄色葡萄球菌）需要处理 1 - 2 h才能全部破壁。请根据不同类别的细菌，适当调整水浴时间。  ▲ Lysozyme干粉需在缓冲液中进行配制，否则会导致其没有活性，其工作终浓度为20 mg/ml。  具体工作缓冲液配制方法为：20 mM Tris，pH8.0；2 mM Na2 -EDTA；1.2 % Triton X-100。

3. ( 可选 ) 若 RNA 残留对后续实验影响较大，加入 4 μl RNase A 至消化液中，振荡 15 sec，室温放置 5 - 15 min。

4.加入20 μl Proteinase K，振荡混匀。

5.加入250ul Buffer GB,振荡混匀，70°C水浴10min。

加入 Buffer GB 可能会产生白色沉淀，一般 70℃放置时会消失，不会影响后续实验。若溶液未变清亮，说明细胞只有部分裂解，可能会导致提取的 DNA 量少且不纯。

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