3D细胞球体培养基质胶

3D细胞球体培养基质胶

应用：

•3D 细胞球体培养 

•小鼠皮下成瘤 

•细胞侵袭 

•适合用于 3D 细胞药物筛检平台 

•细胞生长和分化 

•代谢/毒理学研究

样本类型： 

•肿瘤细胞系、哺乳动物组织

试剂组分

3D 细胞球体培养试验步骤： 

A、试剂制备 

1、A 基质胶：将 A 基质胶溶于 37℃水浴槽回温 10 分钟， 确认*融解. 

2、C 缓冲溶液(1X)制备：使用前将 10X C 缓冲溶液用冰的无细胞培养液(例如： 无血清 DMEM、opt-MEM) 制备成 1X C 缓冲溶液。(不要用 PBS 稀释 C 缓冲液) . 

3、D 缓冲溶液(1X)制备: 使用前用冷的 1x PBS 稀释 10X D 缓冲溶液至 1X D 缓冲溶液. 

B、3D细胞球体培养基质胶的制备 

全部步骤需要在无菌环境内操作，操作步骤如下： 

1、将 24 孔培养板放置于冰上预冷半小时。 

2、细胞计数后取 2×105~2×107 细胞与 0.5 毫升 37℃ 细胞培养基均匀混合，并与 0.5 毫升 37℃ A 胶 按照 1:1 等比例均匀混合，最终细胞密度 1*105~1*107cells/mL。 注：请选择适当的培养溶液与条件进行试验。 

3、取 20-40 微升步骤 2 的混合液滴于 步骤 1 预冷的培养板上，胶体将于 5 分钟内成胶。 注: 测试胶 体是否成胶，可用微量吸管尖温和的触碰胶体表面进行确认。 

4、待胶体成胶后，添加 1 毫升冰的 1X C 缓冲溶液，并盖过步骤 3 的胶溶液，固定 15 分钟。 

5、待 15 分钟固定后，小心的吸取 C 缓冲溶液并置换为适合此细胞生长之培养基溶液。

6、将含有细胞的胶于 37°C 二氧化碳培养箱内进行 7~14 天的培养，并观察细胞球体的形成，按正常培养 基更换频率进行更换操作。 

C、溶胶与收集细胞球体准备程序 

1、小心的将培养基吸取移除，并用 1X PBS 进行清洗。 

2、小心的将 1X PBS 吸取移除，并添加 1 毫升冰的 D 缓冲溶液，盖过胶滴于室温反应 5 分钟。 

3、温和的用 1 毫升移液管吸取，直到胶滴*溶解。 

4、将含有细胞球体的溶液吸入 1.5 毫升离心管，用 1000 rpm 的转速离心 10 分钟，移除上清液体并收集 细胞球体做分析。 

D、收集单颗细胞准备程序 

在分离单细胞前，先按上述溶胶与收集细胞球体准备程序进行操作 

1、添加 trypsin-EDTA 并与收集的细胞球体于 37°C 混合反应。 

2、用 1 毫升移液管混合，直到细胞体*分解。 

3、待细胞球体*分解，加入 3 倍体积的 1X PBS，并用 1000 转的转速进行离心 10 分钟，并移除上清 液体收集沉淀的单细胞做分析。

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